论文摘要
缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor-1 alpha，HIF-1α）是介导细胞对缺氧微环境适应反应的关键性调控因子。研究证实它在多种恶性肿瘤及癌前病变中过度表达，被认为是肿瘤血管生成环节中的核心启动分子，在肿瘤侵袭的新生血管形成过程中有重要作用。VEGF（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一种内皮细胞专一性丝裂原和血管新生强烈的刺激因子，是目前知道的最强烈的血管生成促成因子。研究发现，它是诱导肿瘤血管生长的关键因子，可直接而特异地作用于血管内皮细胞，导致新生血管形成。VEGF的表达受多种因素的调控，缺氧是最强的诱导VEGF表达的因素。子宫内膜异位症（endometriosis，EM或内异症）是一种具有肿瘤生物学特性——向远处转移和侵袭的良性疾病。血管生成（Angiogenesis）不仅在正常子宫内膜的生长修复中起作用，而且在内异症的发生发展中占有重要的位置。研究表明，大量新生血管的生成可能是子宫内膜在异位部位种植、生长从而导致内异症发病的关键。目的：本文采用免疫组织化学法，检测内异症异位、在位内膜及正常内膜组织中HIF-1α、VEGF以及CD34标记的微血管密度（microvessel density，MVD）的表达，探讨HIF-1α与内异症血管生成的关系及其在内异症发病机制中的作用。材料与方法：研究组：68例异位内膜组织标本（内异症组）来自南方医科大学珠江医院妇产科2003年5月～2006年5月因内异症而行手术的病人，采用修订后的美国生育协会内异症分期评分法（r-AFS）对患者进行分期，Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期33例，镜下均为低纤维化并可见到腺体及间质，其中增殖期35例，分泌期33例。20份内异症在位内膜取自上述同时行子宫切除的病人，增殖期11例，分泌期9例。对照组：20例为同期非内异症、非子宫内膜疾病（如子宫肌瘤或子宫纵隔）行子宫全切术或诊断性刮宫，病理证实为正常子宫内膜的标本，其中增殖期10例，分泌期10例。所有标本均经苏木素-伊红（HE）染色和病理确诊。月经周期划分根据末次月经及子宫内膜病理检查结果确定。研究组与对照组年龄、体重、内膜分期的差别无统计学意义。两组月经规律，无内科合并症及免疫性疾病，术前6个月均未使用过激素类药物和未放置宫内节育器。应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法（SP法），检测HIF-1a蛋白在内异症组及对照组中的表达，同时检测VEGF、MVD在上述组织中的表达。统计学处理采用SPSS13.0软件包行检验分析，所有结果均以P＜0.05为有统计学意义。MVD结果以均数±标准差（（?）±s）表示，采用One-way ANOVA、t检验、非参数检验等，相关性分析采用Spearman等级相关分析。结果：1．HIF-1α的表达：HIF-1α阳性表达主要见于异位内膜组织腺上皮细胞胞浆内，个别异位内膜间质亦可有表达，正常子宫内膜、在位子宫内膜、异位子宫内膜中的阳性表达率分别为0％（0／20），20％（4／20），91.18％（62／68），异位、在位与正常子宫内膜中HIF-1α蛋白的表达水平经统计学分析，其差异有统计学意义（x2=63.843，P=0.000）。内异症患者的异位子宫内膜中，HIF-1α的表达在增生期与分泌期无显著性差异（Z=-0.663，P=0.507）；在位子宫内膜中HIF-1α的表达在增生期与分泌期亦无显著性差异（Z=-0.219，P=0.827）。内异症异位内膜与对照组相比，异位内膜表达强度显著高于正常子宫内膜（Z=-9.637，P=0.000）；内异症异位内膜与在位内膜相比，异位内膜表达强度显著高于在位内膜（Z=-7.592，P=0.000）；内异症在位子宫内膜与对照组相比，在位内膜表达强度显著高于正常内膜（Z=-3.593，P=0.000）。Ⅰ～Ⅱ期内异症患者与Ⅲ～Ⅳ期患者表达强度比较，其差异无统计学意义（Z=-0.570，P=0.569）。2．VEGF的表达：VEGF主要定位于腺上皮细胞的胞质中，VEGF阳性表达率在内异症异位、在位、正常子宫内膜分别为64.7％（44／68）、15％（3／20）、5％（1／20）。异位、在位与正常子宫内膜中VEGF蛋白的表达水平经统计学分析，其差异有统计学意义（x2=27.318，P=0.000）。内异症异位子宫内膜中VEGF的表达在增生期与分泌期无显著性差异（Z=-0.748，P=0.455）；内异症在位子宫内膜中VEGF的表达在增生期与分泌期无显著性差异（Z=-0.283，P=0.777）；正常子宫内膜中VEGF的表达在增生期与分泌期无显著性差异（Z=-1.000，P=0.317）。内异症异位子宫内膜与对照组相比，异位内膜表达强度显著高于正常子宫内膜（Z=-4.660，P=0.000）；内异症异位内膜与在位内膜相比，异位内膜表达强度显著高于在位内膜（Z=-3.077，P=0.002）；内异症在位子宫内膜与对照组相比，在位内膜表达强度高于正常内膜（Z=-2.088，P=0.037）。Ⅰ～Ⅱ期内异症患者与Ⅲ～Ⅳ期患者比较，VEGF表达强度比较无显著性差异（Z=-0.077，P=0.939）。3．MVD的表达：不同子宫内膜中MVD表达的差异有统计学意义（F=1786.330，P=0.000）。增生期与分泌期的MVD相比，差异无统计学意义（F=0.065，P=0.800）。内异症异位子宫内膜中MVD的表达在增生期与分泌期无显著性差异（t=-1.784，P=0.079）；内异症在位子宫内膜中MVD的表达在增生期与分泌期无显著性差异（t=0.378，P=0.703）；正常子宫内膜中MVD的表达在增生期与分泌期无显著性差异（t=0.135，P=0.894）。增生期时各组子宫内膜中的MVD差异显著（F=1022.06，P=0.000）；分泌期时各组子宫内膜中的MVD差异亦显著（F=789.045，P=0.000）。内异症异位内膜的MVD显著高于正常内膜（t=51.020，P=0.000）；内异症异位内膜的MVD显著高于在位内膜（t=42.568，P=0.000）；内异症在位子宫内膜的MVD高于正常内膜（t=6.190，P=0.000）。Ⅰ～Ⅱ期内异症患者与Ⅲ～Ⅳ期患者相比，MVD表达水平无显著性差异（t=0.496，P=0.593）。4．HIF-1α的表达与VEGF、MVD之间的相关性：MVD与HIF-1α的表达水平呈显著正相关（r=0.777，P=0.000）；MVD与VEGF的表达水平亦呈显著正相关（r=0.639，P=0.000）；VEGF与HIF-1α的表达水平呈显著正相关（r=0.906，P=0.000）。结论：1．HIF-1α蛋白在内异症组织中异常高表达证明其与内异症密切相关。2．HIF-1α蛋白的表达与VEGF、MVD在内异症组织中的表达呈显著正相关。3．HIF-1α与VEGF可能共同促进了内异症的血管生成。
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标签：缺氧诱导因子论文; 血管内皮生长因子论文; 微血管密度论文; 子宫内膜异位症内异症论文; 血管生成论文; 免疫组织化学论文;