加杨叶黄酮类化合物提取分离研究

论文摘要

杨柳科(Salicacea)杨属(Populus)为落叶乔木,广泛分布于欧、亚、北美,资源丰富。研究发现,杨树中含有药用成分黄酮类化合物,它是杨属植物的主要活性成分之一。加杨是我国广泛种植的树种,加杨叶中富含黄酮类化合物。本论文以加杨叶为研究材料,利用物理和物理化学的原理和手段,研究了其中黄酮类化合物的提取、纯化和分析方法,涉及化学、物理、物理化学、生物物理等多个学科,主要内容包括:(1)加杨叶总黄酮粗提工艺的优化研究。采用有机溶剂提取法,用乙醇溶液对加杨叶黄酮进行了粗提,分光光度法测定其总黄酮含量,并采用正交试验方法确定了加杨叶黄酮类化合物的最佳提取工艺条件,即:提取时间60 min,乙醇浓度50%,液料比为40:1,温度80℃。在此条件下提取,能得到总黄酮12.68 mg/g,即加杨叶总黄酮含量为1.27%。(2)PEG/ (NH4)2SO4双水相体系在加杨叶总黄酮萃取分离中的应用。双水相萃取技术是近年来新发展起来的一项新的分离技术,目前一般用于生物物质如蛋白质类的分离研究,其在杨属植物天然产物提取分离方面的研究目前尚未见公开报道。本文对萃取机理进行了初步探讨,确定了萃取加杨叶黄酮的最佳双水相体系是由25%(w/w) PEG 400和12%(w/w) (NH4)2SO4组成,最优的萃取条件是:pH=9,NaCl的添加量为3.0%,温度为25℃,粗提液体积为3 mL。(3)反相高效液相色谱法分析测定加杨叶中黄酮类化合物芦丁和槲皮素。对样品的制备、流动相的选择和洗脱条件进行了多次实验摸索,初步确定加杨叶黄酮提取物中含有芦丁和槲皮素等黄酮类化合物。杨树叶资源丰富,有着广阔的开发应用前景。本文对加杨叶中的黄酮类化合物提取分离工艺所作的优化和分析条件所作的探索,目前国内外尚未见公开报道,具有一定的创新性,无疑将为杨属植物的综合开发利用提供新的途径与依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一章 文献综述
• 1 杨属植物化学成分研究进展概况
• 2 杨属植物主要活性成分
• 2.1 黄酮类化合物
• 2.1.1 黄酮类化合物的性质
• 2.1.2 黄酮类化合物的生理功能和应用
• 2.1.2.1 黄酮类化合物的生理功能和药理作用
• 2.1.2.2 黄酮类化合物的其它应用
• 2.1.3 黄酮类化合物的提取分离
• 2.1.3.1 植物材料的处理
• 2.1.3.2 黄酮类化合物提取方法
• 2.1.4 黄酮类化合物的分离纯化
• 2.1.4.1 双水相萃取法
• 2.1.4.2 柱层析法
• 2.1.4.3 陶瓷膜微滤法
• 2.1.5 黄酮类化合物的分析方法
• 2.1.5.1 分光光度法
• 2.1.5.2 高效液相色谱法
• 2.1.5.3 平面色谱法
• 2.2 酚甙
• 2.2.1 酚甙的组成
• 2.2.2 酚甙的生理功能和药理作用
• 3 本论文研究内容、研究目的与意义6
• 第二章 加杨叶黄酮类化合物的粗提工艺优化
• 1 分光光度法测定原理
• 1.1 分子吸收光谱的产生
• 1.2 有机化合物的紫外-可见吸收光谱的分子轨道理论
• 1.3 朗伯-比尔定律
• 1.4 黄酮类化合物的分光光度测定
• 2 正交试验设计法
• 3 实验部分
• 3.1 仪器及试剂、材料
• 3.1.1 主要仪器和设备
• 3.1.2 主要药品与试剂
• 3.1.3 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 分光光度法测定黄酮类化合物
• 3.2.1.1 测定原理
• 3.2.1.2 标准溶液的制备
• 3.2.1.3 标准曲线的绘制
• 3.2.1.4 样品总黄酮含量测定
• 3.2.2 加杨叶黄酮类化合物的粗提工艺优化
• 3.2.2.1 原料的准备
• 3.2.2.2 浸提溶剂的选择
• 3.2.2.3 最佳浸提条件的确定
• 3.2.2.4 重复性试验
• 3.2.2.5 精密度试验
• 3.2.2.6 加样回收试验
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 芦丁标准曲线
• 3.3.2 单因素试验
• 3.3.2.1 提取时间的选择
• 3.3.2.2 乙醇浓度的选择
• 3.3.2.3 液料比的选择
• 3.3.2.4 温度的选择
• 3.3.3 最佳提取工艺的考察
• 3.3.3.1 正交试验结果分析
• 3.3.3.2 重复性试验结果
• 3.3.3.3 精密度试验结果
• 3.3.3.4 加样回收试验结果
• 3.4 结论
• 第三章 双水相体系在加杨叶总黄酮萃取分离中的应用
• 1 加杨叶总黄酮分离工艺——双水相萃取
• 1.1 双水相萃取的基本原理
• 1.2 双水相体系的热力学模型
• 1.3 双水相萃取的优点及在天然药用成分中的应用
• 1.4 双水相萃取技术的展望
• 2 实验部分
• 2.1 仪器及试剂、材料
• 2.1.1 主要仪器和设备
• 2.1.2 主要药品与试剂
• 2.1.3 实验材料
• 2.2 实验方法
• 4）₂SO₄ 双水相体系相图的绘制'>2.2.1 PEG/（NH₄）₂SO₄双水相体系相图的绘制
• 2.2.2 加杨叶粗提液的制备
• 2.2.3 双水相体系的配制
• 2.2.4 加杨叶总黄酮含量的测定
• 2.3 结果与讨论
• 4）₂SO₄ 双水相体系相图'>2.3.1 PEG/（NH₄）₂SO₄双水相体系相图
• 4）₂SO₄ 双水相体系的确定'>2.3.2 PEG/（NH₄）₂SO₄双水相体系的确定
• 2.3.2.1 PEG 平均分子量对双水相体系的影响
• 4）₂SO₄ 的质量分数对双水相体系的影响'>2.3.2.2 PEG和（NH₄）₂SO₄的质量分数对双水相体系的影响
• 2.3.3 影响加杨叶黄酮萃取的因素
• 2.3.3.1 pH 值的影响
• 2.3.3.2 NaCl 质量分数的影响
• 2.3.3.3 温度的影响
• 2.3.3.4 粗提液体积的影响
• 2.3.4 精密度试验结果
• 2.4 结论
• 第四章 HPLC 法分析加杨叶中黄酮类化合物芦丁和槲皮素
• 1实验原理——高效液相色谱法（HPLC）
• 1.1 高效液相色谱法基本原理
• 1.2 高效液相色谱仪的组成
• 1.3 高效液相色谱法的特点与局限性
• 1.4 高效液相色谱法的应用
• 1.5 黄酮类化合物的高效液相色谱分析
• 2 实验部分
• 2.1 仪器及试剂、材料
• 2.1.1 主要仪器和设备
• 2.1.2 主要药品与试剂
• 2.1.3 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 对照品溶液的制备
• 2.2.2 样品溶液的制备
• 2.2.2.1 超声法制备样品溶液
• 18小柱纯化法制备样品溶液'>2.2.2.2 C₁₈小柱纯化法制备样品溶液
• 2.2.3 色谱分析条件
• 2.2.4 测定方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 色谱流动相的选择
• 2.3.2 检测波长的选择
• 2.3.3 标准曲线的绘制
• 2.3.4 样品含量测定
• 2.3.4.1 色谱图
• 2.3.4.2 含量计算
• 2.3.5 精密度试验结果
• 2.3.6 重复性试验结果
• 2.3.7 回收率试验结果
• 2.4 结论
• 第五章 结论与展望
• 1 结论
• 1.1 加杨叶黄酮类化合物的粗提工艺优化
• 1.2 双水相体系在加杨叶总黄酮萃取分离中的应用
• 1.3 HPLC 法分析加杨叶中黄酮类化合物芦丁和槲皮素
• 2 本论文创新点
• 3 展望
• 参考文献
• 个人简介
• 导师简介
• 获得成果目录清单
• 致谢