论文摘要
研究背景:TLR4是研究最多的Toll样受体,主要配体为LPS,呼吸道合胞病毒蛋白和脂磷壁酸。TLR4还能识别内源性配体如HSP,硫酸乙酰肝素,纤连蛋白额外域A等。TLR4有两条信号通路:MyD88依赖的信号通路及非MyD88依赖的信号通路。其信号通路激活后能启动炎症因子的转录和合成,与炎症因子的产生密切相关。许多研究表明,TLR4的表达也影响炎症因子的产生。影响TLR4表达的因素众多,但高糖对TLR4表达调节作用的研究,目前国内外均未见文献报道。来自临床和实验室的众多证据表明,炎症在糖尿病肾病的发生发展中具有重要作用。在糖尿病肾病发病机制中,高血糖作为起始因素,促进肾脏固有细胞产生炎症介质,参与糖尿病肾病炎症的发生,相关信号途径的研究有蛋白激酶C,NF-κB,p38MAPK和氧化应激。高糖促进炎症因子表达与TLR4及其信号通路关系的研究国内外均未见报道。目的:（1）探讨高糖对肾小管上皮细胞TLR4表达及其信号通路的影响;（2）探讨高糖对内皮细胞TLR4表达的影响,高糖与LPS共同刺激下对内皮细胞TLR4的表达及MCP-1产生的影响;（3）探讨糖尿病肾病患者外周血单核细胞TLR4的表达及其与血浆MCP-1浓度的关系,以进一步了解TLR4与糖尿病肾病炎症的关系。方法:（1）RT-PCR分析TLR4mRNA的表达;（2）Western Blot和流式细胞术分析TLR4蛋白的表达;（3）Western Blot和免疫沉淀法分析TLR4与MyD88的相互作用,以了解TLR4信号通路是否被激活;（4）ELISA分析MCP-1的浓度。结果:（1）高糖可使小鼠近曲肾小管上皮细胞（MCT细胞）TLR4蛋白的表达上调,高糖环境下MyD88依赖的TLR4信号通路被激活;（2）高糖可使HUVEC细胞TLR4mRNA及其蛋白的表达增加,高糖与LPS共同刺激下,HUVEC细胞TLR4蛋白表达进一步增加,HUVEC细胞TLR4的表达上调与其MCP-1产生增加有关;（3）糖尿病肾病尿毒症患者外周血单核细胞TLR4mRNA及蛋白表达较健康人显著增加,外周血单核细胞TLR4蛋白的表达与血浆MCP-1浓度呈正相关。结论:（1）高糖刺激小鼠近曲肾小管上皮细胞TLR4表达增加,高糖环境下,MyD88依赖的TLR4信号通路被激活。（2）高糖刺激人脐静脉内皮细胞TLR4表达增加,并协同LPS促进内皮细胞表达TLR4及分泌MCP-1。内皮细胞TLR4的表达上调与其MCP-1产生增加有关。（3）糖尿病肾病尿毒症患者外周血单核细胞TLR4表达上调,外周血单核细胞TLR4的表达与血浆MCP-1浓度呈正相关。高糖可促进肾脏固有细胞TLR4的表达, TLR4与糖尿病肾病炎症有关。