BACE1在胰岛素抵抗大鼠脑组织中的表达

论文摘要

背景具最新的流行病学的调研表明,随着社会经济文化的发展,人们的寿命越来越长,社会的老龄化程度越来越严重,其阿尔茨海默病的发病人数不断上升,目前65岁以上人口中AD的发病率大约为5-10%,75岁以上老年人的发病率则升高为20%以上。目前阿尔茨海默病的治疗与护理所花费的代价给家庭及社会造成了严重的负担,已成为当今社会无法回避的严重问题之一,我国所面临的形势更为严重,但迄今为止对其的病因及发病机制了解有限,由此也带来了对其治疗上的有限性,因此对阿尔茨海默病的病因及发病机制的研究显得尤为紧迫与重要。目前的研究已表明胰岛素抵抗是阿尔茨海默病的危险因素之一。但胰岛素抵抗在AD中的发病机制尚不清楚,为此我们进行此胰岛素抵抗与AD关系的研究以为其临床防治提供一定的理论依据。目的建立胰岛素抵抗大鼠模型,观察胰岛素抵抗大鼠的海马病理组织学特征,以及淀粉蛋白前体p位分解酶1（β-site APP-cleaving enzymel, BACEl）在海马组织中的表达,从而探讨胰岛素抵抗在阿尔茨海默病（AD）发病中的作用机制。方法随机挑选一月龄Wistar雄性大鼠30只。用随机数字法在所购大鼠中随机挑选10只设为空白对照组（空白组）,给予普通饲料喂养；其余的自始至终给予高脂高糖高蛋白喂养,3个月后,根据胰岛素抵抗指数将分设为对照组和实验组（空白对照组大鼠胰岛素抵抗指数（RI）均数加3个标准差的视为胰岛素抵抗）,每组随用随机数字法挑选10只参与实验。实验组按照3mg/kg剂量双侧侧脑室内一次性注射链脲佐菌素,建立胰岛素抵抗动物模型。空白组,对照组,双侧侧脑室内一次性注射柠檬酸缓冲液。3个周后用水迷宫实验检测大鼠认知功能和行为学改变,用ELISA法、PCR技术和Western blot等分子生物学技术研究相应脑区内BACEl的表达水平。结果1.实验组有明显的学习、记忆障碍,学习记忆力明显下降。与对照组相比：实验组大鼠搜索平台的潜伏期较对照组延长,统计学分析有显著性差异（P<0.01）,对照组与空白组大鼠之间未见显著性差异（P>0.05）；实验组大鼠跨越平台次数比对照组大鼠显著减少,统计学有显著性差异（P<0.01）,对照组与空白组大鼠见显著性差异（P>0.05）。2.病理组织学检测表明实验组大鼠脑内未出现阿尔茨海默氏病特征性病理改变3.实验组BACE1表达较对照组、空白组表达明显增高,统计学分析有显著性差异（P<0.01）。两个对照组比较,无显著性差异（p>0.05）。结论1.在胰岛素抵抗大鼠中,胰岛素抵抗糖代谢异常明显但大鼠脑内未见阿尔茨海默病特征性病理改变。2.胰岛素抵抗大鼠脑组织中BACE1表达增高,胰岛素抵抗参与了阿尔茨海默病的发病机制。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1. 实验动物
• 1.1.2. 主要试剂和耗材
• 1.1.3. 主要仪器设备
• 1.1.4 常用试剂的配制
• 1.1.5 实验动物的分组
• 1.2 方法
• 1.2.1 胰岛素的测定
• 1.2.2 胰岛素指数的评价
• 1.2.3 动物模型的制作
• 1.2.4 行为学测试
• 1.2.5 标本的制备
• 1.2.6 免疫组织化学染色
• 1.2.7 用ELISA法检测海马BACE1酶的活性
• 1.2.8 Western blot检测
• 1.2.8.1 蛋白的提取
• 1.2.8.2 用考马斯亮蓝G-450蛋白测定法-测定蛋白浓度
• 1.2.8.3 SDS-PAGE电泳
• 1.2.9 荧光相对定量PCR检测Aβ代谢酶的mRNA水平
• 1.2.9.1 RNA的提取
• 1.2.9.2 鉴定所提取的RNA成功与否
• 1.2.9.3 两步法进行实时荧光相对定量PCR
• 1.2.9.4 统计学方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 问题与展望
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表文章情况
• 个人简历
• 致谢