长角血蜱孤雌生殖种群卵黄蛋白的纯化及性质分析

论文摘要

蜱类是营专性吸血的外寄生节肢动物,传播很多种人、畜疾病,并且具有很强的繁殖能力,对人类健康和畜牧业造成极大的危害。蜱类生殖生理学在国际上一直是研究的热门领域,其中卵黄发生及其调控是该领域的核心内容。本研究以长角血蜱孤雌生殖种群为研究对象,运用生物化学、分析化学、气相色谱/质谱等现代化生物学及其交叉学科的研究方法,在纯化出其Vn的基础上,对Vn的理化性质进行研究,研究结果对于深入阐明蜱类卵黄发生,揭示蜱类生殖生物学规律、适应对策和生理调节机制具有重要的科学意义。孤雌生殖种群的Vn只有一种,是一种血糖脂复合蛋白,等电点为5.4,相对分子质量为370 kD,由9个亚基组成,亚基相对分子质量分别为203 kD、147 kD、126 kD、82 kD、74 kD、70 kD、61 kD、47 kD和31 kD。应用GC/MS技术鉴定Vn脂类,Vn脂类的主要成份为2,4-二叔丁基苯酚、14-甲基-十五酸甲酯、十八碳烯酸甲酯和9-十八碳烯酸甲酯。用GC/MS技术鉴定交配期、半饱血期、饱血当天和产卵当天卵巢的脂类成份,其脂类种类在各时期没有变化,各脂类的含量有所变化,卵巢脂类的主要有11种,分别为2,4-二叔丁基苯酚、14-甲基十五烷酸甲酯、3,5-二（1,1甲基乙基）-4羟基苯丙酸甲酯、12-二十八碳酸甲酯、反-9-十八碳烯酸甲酯、十八烷酸甲酯、10-甲基十八烷酸甲酯、5,8,11,14-二十碳四烯酸乙酯、（Z）--9-十八烯酸酰胺、1-环己胺和（Z）-9-十八烯酸-2-羟基乙基酯

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 综述
• 1 长角血蜱孤雌生殖种群
• 2 卵黄原蛋白和卵黄蛋白
• 第二章 长角血蜱孤雌生殖种群卵黄蛋白的纯化
• 1 材料与方法
• 1.1 长角血蜱的采集与喂养
• 1.2 主要试剂
• 1.3 卵的收集、粗提
• 1.4 卵黄蛋白的纯化
• 2 结果
• 3 结论
• 第三章 卵黄蛋白的性质分析
• 1 材料方法
• 1.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
• 1.2 糖脂蛋白染色的过程
• 1.3 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
• 1.4 卵黄蛋白等电点的测定
• 1.5 GC/MS 法分析卵黄蛋白脂类成分
• 1.5.1 样品制备
• 1.5.2 测定条件
• 1.6 主要试剂的配制
• 1.6.1 电泳溶液的配制
• 1.6.2 脂蛋白染色溶液的配制
• 1.6.3 等电点溶液配制
• 2 结果
• 2.1 卵黄蛋白纯度的及糖脂性测定
• 2.2 卵黄蛋白的分子量及亚基组成
• 2.3 卵黄蛋白的等电点
• 2.4 卵黄蛋白脂类成分分析
• 3 结论
• 第四章 质谱鉴定卵黄蛋白
• 1 材料方法
• 1.1 样品采集
• 1.2 胶内酶解方法操作步骤
• 2 结果
• 3 结论
• 第五章 卵巢脂类的GC/MS 鉴定结果
• 1 材料方法
• 1.1 样品采集
• 1.2 PBS 溶液的配置
• 1.3 动物组织总脂抽提（Folch 法）
• 2 结果
• 3 结论
• 第六章 讨论
• 1 卵黄蛋白的提取及纯化
• 2 卵黄蛋白的性质分析
• 3 卵巢脂类的分析
• 参考文献
• 致谢