核果类果树上李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的血清学及RT-PCR检测

论文摘要

核果类果树是一类种植较为广泛的果树,在我国南方以桃、李、杏、油桃等为主。李坏死环斑病毒（Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV）和李矮缩病毒（Prunedwarfvirus,PDV）是严重危害核果类果树的两种重要病毒,导致被感染果树生长衰退、产量锐减,对这两种病毒进行有效的检测是防止这两种病毒的传播从而减少其危害的重要环节。本研究采用生物学、血清学和分子生物学方法对桃、李、杏和油桃四种核果类果树上的PNRSV和PDV进行了检测研究,取得的结果如下:1.从我国湖北省武汉、咸宁等地区搜集了127份的桃、李、杏及油桃样品,采用A蛋白夹心酶联免疫吸附法（Protein A Sandwich Enzyme-Linked ImmunoSorbentAssay,PAS-ELISA）对这些样品进行了PNRSV和PDV两种病毒的检测。结果显示,PNRSV和PDV总检出率分别为26.8%及16.5%,其中,在54份桃树样品中PNRSV的检出率为25.9%,PDV的检出率为16.7%;在17份李树样品中PNRSV的检出率为35.3%,PDV的检出率为29.4%;在20份杏树样品中PNRSV的检出率为25.0%,PDV的检出率为15.0%;在36份油桃树样品中PNRSV的检出率为25.0%,PDV的检出率为11.1%。两种病毒的复合侵染率为14.2%。2.对PAS-ELISA检测呈阳性的样品,在温室中采用汁液摩擦接种法草本指示植物黄瓜（Cucumis sativus）和昆诺藜（Chenopodium quinoa）上进行了生物学鉴定,检测结果显示,在10份桃树样品和6份李树样品中各有5份样品在接种的黄瓜和昆诺藜上都诱导产生了明显的局部和系统性症状;所接种的杏树样品在这两种指示植物上都没引起症状表现,而9份油桃样品中有2个样品在黄瓜上引起轻微症状。3.对PAS-ELISA及生物学检测PNRSV和PDV呈阳性的部分样品,提取总RNA,采用基于PNRSV和PDV的外壳蛋白（Coat Protein,CP）基因部分片段核苷酸序列设计的引物分别对这些样品进行了反转录-多聚酶链式反应（Reverse TranscriptionPolymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测,所选取样品都分别扩增出了预期大小约为449bp和172bp的目标片段。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 1 文献综述
• 1.1 李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的基本特征
• 1.1.2 李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的危害
• 1.1.3 李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的生物学特性
• 1.1.4 李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的分子特征
• 1.1.4.1 李坏死环斑病毒的分子特征
• 1.1.4.2 李矮缩病毒的分子特征
• 1.2 李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的防治措施
• 1.3 李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的检测研究
• 1.3.1 生物学检测
• 1.3.2 血清学检测
• 1.3.3 分子生物学检测
• 1.4 研究目的和意义
• 2 材料和方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 材料来源
• 2.1.2 所用试剂
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 PAS-ELISA（Protein A sandwich ELISA）检测
• 2.2.2 生物学检测
• 2.2.3 RT-PCR检测
• 2.2.3.1 总RNA提取
• 2.2.3.2 引物的设计与合成引物
• 2.2.3.3 反转录合成第一链cDNA
• 2.2.3.4 PCR扩增
• 2.2.3.5 PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳
• 2.2.3.6 PCR产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 3 结果和分析
• 3.1 血清学检测结果
• 3.3 生物学检测结果
• 3.4 PNRSV和PDV的RT-PCR检测结果
• 3.5 PAS-ELISA、生物学和RT-PCR三种检测结果比较分析
• 4 结论与讨论
• 参考文献
• 附 试验所用溶液的配制
• 致谢