论文摘要
目的:探索在孕鼠不同妊娠时期给予不同剂量的环磷酰胺（cyclophosphmide,CP）对孕鼠体重和血清蛋白的影响,对所孕胎鼠的毒性和致畸作用,以及对胎鼠大、小脑皮层中c-Fos、Bax表达的影响,为临床及发育生物学研究提供资料参考。方法:将雌性Wistar孕鼠按照妊娠时间随机分为4组（每组12只）。A组:妊娠第7-9天腹腔注射CP;B组:妊娠第10-12天腹腔注射CP;C组:妊娠第13-15天腹腔注射CP;D组:妊娠第7-15天腹腔注射等量的生理盐水。每组又分为5、8、16 mg/kg体重三个剂量组。于妊娠第0、3、6、9、12、15、18、20天称量孕鼠的体重;于妊娠第20天,采用乙醚吸入麻醉孕鼠,打开胸腹腔,心脏采血,取出胚胎。用SDS–PAGE检测孕鼠血清蛋白,观察活胎、死胎和吸收胎率、胎鼠畸形,测量胎鼠体重、身长、尾长;将1/3活胎鼠用茜素红骨骼染色后,检查全身骨骼发育程度,1/3用Bouin’s液固定,用于检查脑组织结构,1/3用4%多聚甲醛固定做免疫组化检测胎鼠大、小脑皮层中c-Fos和Bax的表达;采用YA-G5000系列医学细胞影象分析软件对c-Fos和Bax的表达进行定量分析。结果:1.在妊娠期给予5mg/kg体重CP对母鼠体重增加无明显的抑制作用;分别给予8、16 mg/kg体重CP,对孕鼠体重的增加有显著抑制作用（P<0.05-0.01）。2.SDS– PAGE检测结果显示:分别给予5、8、16mg/kg体重CP,对母鼠血清蛋白带数无明显影响。3.在孕期分别给予5、8、16mg/kg体重CP,对胎鼠的成活率或畸形都有影响。在相同剂量中,胎鼠的成活率随给药剂量的增加而降低,致畸率则增高。4.在妊娠第7-9天给予8 mg/kg体重CP,对胎鼠体重、体长和尾长有显著的抑制作用（P<0.05）,其它各组未见明显抑制作用。5.给药后,5 mg/kg体重组胎鼠未观察到明显的外观畸形;8 mg/kg体重组中,随给药日期的提前,畸形数量及严重程度都有明显的增加;16 mg/kg体重组中,在妊娠第7-9、10-12天给药组未见成形胚胎,在妊娠13-15天给药组的胎鼠中观察到枕骨裂、脑膨出、下颚裂等畸形胚胎。6. 5 mg/kg体重组胎鼠未观察到明显的脑部结构畸形;8 mg/kg体重组中,随给药日期的提前,观察到的脑部畸形程度有明显的增加;16 mg/kg体重组中,在妊娠第7-9、10-12天给药组未见成形胚胎,在妊娠第13-15天给药组的胎鼠观察到侧脑室扩大,大脑皮质、颞叶、双侧被盖区及结合臂发育不全。7. 5 mg/kg体重组胎鼠未观察到明显的骨骼畸形;8 mg/kg体重各组中,随给药日期的提前,骨骼畸形程度和畸形数量呈现明显的增加趋势;16 mg/kg体重组中,在妊娠第7-9、10-12天对给药组未见成形胚胎,在妊娠第13-15天给药组的胎鼠观察到枕骨发育不全,椎骨裂开等畸形。8.给药后,相同剂量组,对胎鼠大脑皮层和小脑皮层中c-Fos、Bax表达随给药时间提前c-Fos、Bax阳性表达增强;给药时间相同组,随给药剂量的增加c-Fos、Bax表达增强,在大脑皮层和小脑皮层中外颗粒层细胞呈现出强阳性反应,对该层细胞的诱导凋亡作用也更强,尤其在小脑皮层的外颗粒层和蒲氏层细胞阳性反应更强,这与胎鼠出生后小脑发育过程中外颗粒层变薄、迁移的结果相符。结论:CP对孕鼠体重的增长有明显的抑制作用,对孕鼠血清蛋白无明显的影响;对胎鼠发育有明显的毒性和致畸作用,表现为死胎、骨骼发育不全、脑膨出等。在剂量相同时,胎鼠的成活率随给药时间的提前而降低,致畸率则增高;给药时间相同,胎鼠的成活率随给药剂量的增加而降低,致畸率则增高。CP能诱导胎鼠大脑皮层、小脑皮层中c-Fos、Bax的表达,其结果与给药剂量和给药时间有关,对细胞凋亡的诱导亦增强;主要表现为:在大脑皮层各层均有不同程度的阳性分布,第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ层较多,呈现出强阳性反应;在小脑皮层中各层均有不同程度的阳性细胞分布,相对而言,以外颗粒层（EGL）和蒲氏层细胞阳性反应更强,这与大鼠小脑的发育历程相符。