从益髓生血颗粒调控β-珠蛋白及相关基因表达探讨肾生髓理论的分子机制

论文题目: 从益髓生血颗粒调控β-珠蛋白及相关基因表达探讨肾生髓理论的分子机制

论文类型: 博士论文

论文专业: 中西医结合基础

作者: 柴立民

导师: 吴志奎

关键词: 肾生髓理论,地中海贫血,益髓生血颗粒,中医药治疗,珠蛋白及相关因子,基因表达调控,分子机制

文献来源: 中国中医研究院

发表年度: 2005

论文摘要: 本研究是在导师吴志奎研究员肾生髓理论现代研究与临床实践的学术思想指导下,以国家自然基金资助课题为依托,把中医的理论思维和前沿技术有机结合,对益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血的整体效应和疗效的分子机制进行研究。在该药取得显著临床疗效的基础上,采用ELISA、RT-PCR、激光共聚焦显微镜扫描技术、凝胶滞后试验、real-time PCR、DD RT-PCR等实验技术,从造血刺激因子的表达,β-珠蛋白基因簇LCR HS2序列DNA与蛋白质相互作用,珠蛋白基因表达调控发挥重要作用的红系特异的反式作用因子基因的表达,以及与红细胞溶血相关的铁蛋白基因表达等方面,多层次研究了益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血调控珠蛋白基因表达的分子机制,取得了有学术价值的研究结果。一、理论研究 1、从肾生髓与藏精的内在关系、肾生髓与髓养骨、肾生髓通于脑以及肾生髓生血四个方面,对历代有关肾生髓理论的文献论述进行分析归纳,以期加深对经典肾生髓理论的认识。通过对近年来有关肾生髓理论现代研究的相关文献分析归纳,从肾生髓与神经系统功能的相关性、肾生髓和髓养骨物质基础的现代研究、肾生髓与髓生血的客观性研究和肾生髓理论分子机制的研究等方面,总结肾生髓理论的现代研究成果,为中医经典理论的现代研究探索新的思路和方法。 2、通过对珠蛋白基因簇的组织及表达的时空顺序性、珠蛋白基因的结构与表达、珠蛋白基因表达与红系分化起重要作用的转录因子、珠蛋白基因的顺式作用元件以及β-珠蛋白基因簇位点调控区的功能等方面分析归纳,了解珠蛋白基因表达调控的作用机制,更深入的认识珠蛋白生成障碍性贫血的发病机制,为临床研究提供理论依据;总结导师多年来的运用补肾生血中药治疗β-地中海贫血的研究成果,深入学习导师的学术思想和科研思路。二、益髓生血颗粒调控珠蛋白及相关基因表达的研究 1、从两个方面对益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血的整体效应进行了研究,研究结果如下:①采用随机单盲安慰剂平行对照进行临床观察,研究结果显示:治疗组血液学参数Hb、RBC、Ret、HbF自给药第1个月至治疗结束均明显提高,安慰剂对照组无明显变化;治疗组患者肝脾肿大明显缓解,B超显示患者脾脏横径治疗后明显小于治疗前;治疗后患者临床中医证候明

论文目录:

中文摘要

英文摘要

英文缩略语

前言

上篇理论研究

第一章肾生髓理论的形成与发展

一、肾生髓与藏精的内在关系

二、肾生髓与髓养骨

三、肾生髓通于脑

四、肾生髓与髓生血

参考文献

第二章肾生髓理论的现代研究进展

一、肾生髓与神经系统功能的相关性

二、肾生髓与髓养骨物质基础的现代研究

三、肾生髓与髓生血的客观性研究

四、肾生髓理论的分子机制研究

五、问题和展望

参考文献

第三章珠蛋白基因的表达调控及开关机制

一、珠蛋白基因簇的组织及表达的时空顺序性

二、珠蛋白基因的结构与表达

三、珠蛋白基因表达与红系分化起重要作用的转录因子

四、珠蛋白基因的顺式作用元件

五、β-珠蛋白基因簇位点调控区

参考文献

第四章中药治疗地中海贫血的分子基础与临床研究

第五章地中海贫血的药物治疗进展

一、输血配合铁螯合剂治疗

二、γ-珠蛋白基因激活剂

三、珠蛋白合成调节剂

四、α-肽链合成抑制剂

五、中医药治疗

六、展望

参考文献

理论研究总结

下篇益髓生血颗粒调控珠蛋白及相关基因表达的研究

第一章益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血整体效应的研究

第一节益髓生血颗粒对β-地中海贫血患者血液学参数及相关症候的影响

1 病例选择

2 材料与方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第二节益髓生血颗粒对β-地中海贫血患者骨髓幼稚红细胞DNA和RNA荧光强度的影响

1 材料与方法

1．1 病例选择

1．2 骨髓血细胞涂片的制备

1．3 AO染色

1．4 观察方法

2 结果

2．1 治疗前后骨髓幼稚红细胞DNA和RNA AO荧光染色叠加图像分析

2．2 治疗前后骨髓幼稚红细胞DNA和RNA三维立体重组图像分析

3 讨论

参考文献

小结

第二章益髓生血颗粒对造血刺激因子表达的影响

1 ELISA检测治疗前后患者外周血EPO含量的改变

1．1 病例一般资料

1．2 材料与方法

1．3 结果

2 real-time PCR检测患者治疗前后外周血中EPO R、c-kit及骨髓血中SCF基因表达的改变

2．1 病例一般资料

2．2 所用试剂及部分仪器

2．3 有核血细胞分离

2．4 Total RNA提取

2．5 逆转录反应

2．6 real-time PCR

2．7 1.5％琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果

2．8 GeneAMP 5700 SDS software分析荧光检测结果

2．9 统计学方法

2．10 治疗前后患者外周血细胞c-kit、EPO R和骨髓有核细胞SCF基因表达的改变

3 讨论

3．1 益髓生血颗粒对GM-CSF基因表达的影响

3．2 益髓生血颗粒对EPO和EPO R表达的影响

3．3 益髓生血颗粒对SCF和c-kit基因表达的影响

小结

参考文献

第三章益髓生血颗粒对β-珠蛋白LCR HS2位点DNA与核蛋白结合作用的影响

1 材料与方法

1．1 实验病例选择

1．2 核蛋白提取

1．3 HS2位点DNA探针制备

1．3．1 大量制备pBSK质粒DNA

1．3．2 目的片段探针制备

1．3．3 通过酶切反应获得多条DNA片段

1．3．4 同位素探针标记

1．3．5 核蛋白粗提物与DNA探针结合

1．3．6 聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影

1．3．7 电泳结果

2 结果

3 讨论

小结

参考文献

第四章益髓生血颗粒对珠蛋白表达调控反式作用因子基因表达的影响

1 材料与方法

1．1 病例一般资料

1．2 治疗方法

1．3 骨髓有核细胞样品采集

1．4 Total RNA的提取与RT反应

1．5 real-time PCR检测治疗前后患者相关转录因子基因表达的改变

1．6 统计学方法

2 结果

3 讨论

3．1 益髓生血颗粒对GATA-1、GATA-2基因表达的调节作用

3．2 益髓生血颗粒调节NF-E2基因表达的作用机制

小结

参考文献

第五章：益髓生血颗粒对β-地中海贫血患者铁蛋白基因表达的影响

1 材料与方法

1．1 实验病例选择

1．2 骨髓有核细胞分离

1．3 Total RNA提取

1．4 逆转录反应

1．5 通过PCR扩增来增加模板量

1．6 摸索PCR反应最佳退火温度

1．7 同位素标记随机引物

1．8 PCR反应

1．9 PAGE，放射自显影

1．10 对照胶片切下差异条带进行PCR反应

1．11 鉴别表达有差异的条带

2 结果

3 讨论

小结

参考文献

实验研究总结

结语

致谢

研究生个人简介

攻读博士期间发表论文、参加课题及参加学术会议

附件

β-地中海贫血诊断标准和疗效评定标准

发布时间: 2005-07-28

参考文献

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