复合OP-1多肽水凝胶缓解系统对小鼠成骨细胞ALP、OC和Cbfα1表达影响的实验研究

论文摘要

目的:本实验通过观察OP-1和复合OP-1多肽水凝胶缓释系统对小鼠成骨细胞（MC3T3-E1）ALP、OC和Cbfα1蛋白表达的影响,探讨OP-1对成骨细胞分化的促进作用和复合OP-1多肽水凝胶缓释系统缓慢释放OP-1并促进成骨细胞分化的作用及可能机制,为进一步研究复合OP-1多肽水凝胶缓释系统提供实验依据。方法:实验分为3组,即OP-1组、OP-1/水凝胶组和对照组。无菌圆玻片平铺于无菌24孔培养板底,将传代后的MC3T3-E1以细胞密度5×104个/ml接种在各组圆玻片上,每孔培养液均为200μl,置37℃、5%CO2、95%湿度培养箱中培养。其中OP-1/水凝胶组在接种细胞前每孔圆玻片周边涂布25μl OP-1多肽水凝胶缓释系统（25μl RADA16包封50 ng rhOP-1）;OP-1组在细胞接种后吸去等体积培养液加入50ng rhOP-1;对照组则不采用任何措施。在1 d、4 d、7 d、10 d、14 d各时间点,吸去培养板中培养液,轻轻取出细胞爬片,立即用免疫细胞化学方法检测各组细胞ALP、OC和Cbfα1的表达。应用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统进行图像分析,获得平均灰度值（最黑的灰度值为0,最白的灰度值为255,灰度值越小,阳性表达越多）。应用SPSS16.0统计学软件,采用单因素方差分析对实验结果进行统计学分析,P＜0.05有统计学意义。结果:免疫细胞化学染色结果显示,ALP、OC和Cbfα1阳性着色主要位于细胞质内,表现为细胞质内棕黄色颗粒。1.OP-1对MC3T3-E1细胞质内ALP、OC、Cbfα1表达的影响OP-1组细胞培养1 d细胞质内ALP、OC无阳性表达,而Cbfα1有阳性表达,与对照组比较有显著性差异（P＜0.05）,表达量略多于对照组。培养4 d、7 d、10d、14 d,细胞质内ALP、OC、Cbfα1均有阳性表达,表达量均明显多于对照组（P＜0.05）。培养7 d,ALP、Cbfα1表达量达高峰,而OC在10 d表达量达高峰。2.复合OP-1多肽水凝胶缓释系统对MC3T3-E1细胞质内ALP、OC、Cbfα1表达的影响OP-1/水凝胶组细胞培养1 d细胞质内ALP、OC均无阳性表达,而Cbfα1有阳性表达,但与对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。培养4 d、7 d、10 d、14 d,ALP、OC、Cbfα1均有阳性表达,表达量均明显多于对照组（P＜0.05）。培养4 d、7 d、10 d,ALP表达量均少于OP-1组（P＜0.05）,培养14 d与OP-1组比较无显著性差异（P＞0.05）。培养4 d、7 d、10 d、14 d,OC表达量均少于OP-1组（P＜0.05）。培养1 d、4 d、7 d、10 d,Cbfα1表达量均少于OP-1组（P＜0.05）,14 d与OP-1组比较无显著性差异（P＞0.05）。培养10 dALP、OC、Cbfα1表达量均达高峰。结论:1.OP-1能促进成骨细胞分化,增加ALP、OC和Cbfα1的表达。2.复合OP-1多肽水凝胶缓释系统能促进成骨细胞分化,增加ALP、OC和Cbfα1的表达。3.复合OP-1多肽水凝胶缓释系统使成骨细胞ALP和Cbfα1的表达高峰推迟,可能具有缓释效果。

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• ABSTRACT
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• 目次
• 正文
• 引言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 综述
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