黑木耳单核杂交菌株远源性的研究

论文摘要

近几年来,随着人民生活水平的逐渐提高和科学技术水平的不断发展,黑木耳的食用和药用价值得到了人们的广泛认可。随着黑木耳的消费量逐年递增,带动着黑木耳栽培及下游产业的迅速发展。菌种是黑木耳产业的根本,没有好的菌种,将严重制约着黑木耳产业的发展。与其他食用菌育种方式相比,黑木耳的品种选育工作比较落后,很少有杂交品种,目前使用情况较好的菌种都是通过野生黑木耳菌种人工驯化得来的。选育黑木耳新品种已成为发展该产业的重中之重。杂交育种是目前育种方法中最有成效的一个,黑木耳杂交育种都是用从亲本菌株分离得到的孢子单核菌株进行杂交,进而筛选并获得优良菌株。本实验首先选取HW5号和139号两株远源性大的优良菌种作为亲本菌株,然后制备HW5号菌株的原生质体菌株和139号菌株的孢子菌株,利用荧光显微镜和简单重复序列(ISSR)分子标记技术以及酯酶同工酶法来确定菌株单、双核及交配型,分别获得20个孢子单核菌株和2种交配型的原生质体单核菌株,用这两种单核菌株进行配对杂交,共获得6个杂交菌株。进一步通过酯酶同工酶方法证实6个杂交菌株中均表现有不同程度的遗传互补性,共获得37条酶带,1条新增酶带,并用ISSR分子标记技术对杂交菌株进行分析,采用NTSYS2.10e软件计算菌株间的遗传相似系数,然后进行聚类分析。结果表明,6个杂交菌株共分成5类,Z2、Z4在遗传距离上距亲本菌株较远。Z1、Z2、Z4与亲本相比在同工酶和ISSR扩增图谱上有明显优势。通过出耳试验,获得杂交菌株的产量,耳型,抗杂菌能力,商品性能等指标,再进行综合评价,初步得到了优良的具有远源性的杂交Z1。本论文筛选出具有双亲优秀基因的远源性菌株,为下一步能够从杂交菌株中筛选出抗逆性强、品质好、产量高、具有综合优良性状的新菌株打下基础,减少初筛栽培量、提高育种效率,不断满足国内外市场的需求,提高我国菌种的质量,为我国黑木耳产业的长足发展做出贡献。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第1章 前言
• 1.1 黑木耳简介
• 1.1.1 黑木耳食用价值
• 1.1.2 黑木耳药理作用
• 1.1.3 黑木耳经济价值
• 1.2 黑木耳育种方法简介
• 1.2.1 人工选择育种
• 1.2.2 诱变育种
• 1.2.3 原生质体融合育种
• 1.2.4 杂交育种
• 1.2.5 基因工程技术育种
• 1.3 黑木耳菌种鉴定方法
• 1.3.1 拮抗分析
• 1.3.2 同工酶分析
• 1.3.3 分子生物学技术
• 1.4 研究的目的与意义
• 第2章 材料与方法
• 2.1 供试材料
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 供试试剂
• 2.1.3 供试培养基
• 2.1.4 仪器与设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 拮抗试验
• 2.2.2 ISSR 分子标记技术
• 2.2.3 荧光核相检测
• 2.2.4 酯酶同工酶鉴定
• 2.2.5 原生质体单核菌株的制备
• 2.2.6 孢子单核菌株的制备
• 2.2.7 杂交菌株获得
• 2.2.8 杂交菌株远源性的研究
• 第3章 结果与分析
• 3.1 亲本菌株选择
• 3.1.1 拮抗实验结果
• 3.1.2 亲本菌株ISSR 分析
• 3.2 孢子单核菌株的获得
• 3.2.1 出耳试验结果
• 3.2.2 孢子菌株的制备结果
• 3.2.3 孢子菌株的荧光显微镜检测结果
• 3.3 单核孢子菌株酯酶同工酶结果
• 3.4 20 个孢子单核菌株ISSR 分析
• 3.4.1 20 个孢子单核菌株DNA 提取结果
• 3.4.2 20 个孢子单核菌株ISSR 扩增结果
• 3.5 原生质体单核菌株的制备结果
• 3.5.1 原生质体再生菌株的制备结果
• 3.5.2 原生质体菌株荧光显微镜检测
• 3.6 原生质体菌株酯酶同工酶分析结果
• 3.7 原生质体菌株ISSR 分析结果
• 3.7.1 原生质体菌株DNA 提取结果
• 3.7.2 原生质体菌株ISSR 扩增结果
• 3.8 单核亲本菌株筛选
• 3.9 杂交菌株的获得
• 3.10 杂交菌株的鉴定
• 3.10.1 荧光显微镜检测
• 3.10.2 拮抗实验结果
• 3.10.3 杂交菌株酯酶同工酶谱分析结果
• 3.10.4 杂交菌株 ISSR 扩增结果
• 3.11 栽培试验结果
• 第4章 结论
• 参考文献
• 致谢