论文题目: 甘菊LEFAY同源基因的克隆与表达分析
论文类型: 博士论文
论文专业: 园林植物
作者: 马月萍
导师: 戴思兰
关键词: 甘菊,基因,花发育,组织原位杂交,烟草转化
文献来源: 北京林业大学
发表年度: 2005
论文摘要: LFY基因在植物花发育花过程中具有重要的作用,作为花分生组织决定基因,不仅决定着花由花序分生组织向花分生组织的转变,且超表达可以使植物的花期提前。此外,它还接连GA成花途径和长日途径的信号继而诱导花分生组织的转变,同时还是活化花器官基因的关键基因。我们根据LFY同源基因的结构特点设计特异性引物,利用5’和3’RACE获得了甘菊中LFY同源基因DFL。 DFL基因cDNA全长为1435bp包含一个ORF全长1239bp。编码412个氨基酸和一个终止密码子(Genbank登录号为AY559245,命名为DFL)。其推测的氨基酸序列中包含有一些转录因子的结构特征:脯氨酸富集区、中央酸性域、亮氨酸拉链结构及由赖氨酸和精氨酸残基形成的碱性域。氨基酸序列与金鱼草和拟南芥的同源性分别为70%和63%。 根据DFL基因的cDNA序列设计了两对跨越内含子区域的引物,通过基因组PCR,得到了甘菊中DFL基因的转录区基因组序列。基因组结构中包含有两个内含子和三个外显子:其中内含子1长为583bp,内含子2长1091bp,剪接点位置处的氨基酸与其它大部分植物的相同。 Southern杂交表明DFL基因在甘菊基因组中以单拷贝形式存在。 通过RT-PCR分析,发现DFL基因在甘菊的幼茎和幼叶中有少量表达,花芽中表达强烈,但在根中没有表达。 组织原位杂交表明甘菊成花时营养生长点、茎尖肥大期、总苞鳞片形成期、小花原基形成期及花冠形成时均有不同程度的表达。其中在萼片原基、总苞鳞片形成期的生殖锥中和雄蕊原基中强烈表达。在甘菊成花过程中起始开始到其发育成熟的整个过程中不同程度的表达量,这也表明它在甘菊成花的发育中起着重要作用。此外,包囊在花芽外面的正在发育的叶子中及成熟叶片的叶原基中,DFL基因也有表达。因此,组织位杂交的结果基本与RT-PCR相一致。 为了鉴定DFL基因的功能作用,构建了由35S启动DFL基因的正反义表达载体(载体中同时包含有由另外两个35S启动的潮霉素筛选基因和GUS组织化学染色基因)转化烟草。分子生物学和组织化学染色已鉴定出部分转化成功的植株。烟草的转化成功为进行菊花本身的转化奠定了一定的技术基础。
论文目录:
摘要
Abstract
缩写词
第一章 绪论
§1.1 植物成花的研究进展
§1.1.1 环境条件对植物成花的调控
§1.1.1.1 光周期对植物开花的影响及机理
§1.1.1.2 春化作用对成花的影响及分子机理
§1.1.2 内部因子对成花的影响
§1.1.3 生长调节剂对植物成花的影响
§1.1.4 植物成花过程的调节机制
§1.2 植物LFY同源基因的研究进展
§1.2.1 植物LFY基因的分离
§1.2.2 LFY同源基因的表达特性
§1.2.3 LFY同源基因功能作用的研究
§1.2.4 LFY基因在植物成花基因网络中的调控
§1.2.5 其它生理因子对LFY基因表达的影响
§1.2.6 问题与展望
§1.3 本论文的设计思想
第二章 甘菊LFY同源基因DFL的克隆
§2.1材料和方法
§2.1.1 材料和方法
§2.1.1.1 材料
§2.1.2 方法
§2.1.2.1 甘菊中LFY同源基因cDNA片段的克隆
§2.1.2.2 甘菊中LFY同源基因cDNA全长的克隆
§2.1.2.3 甘菊DFL基因转录区基因组序列的获得
§2.1.2.4 Southern杂交分析
§2.2 结果
§2.2.1 甘菊LFY基因cDNA片段的分析
§2.2.2 甘菊／LFY同源基因全长cDNA分析
§2.2.3 甘菊DFL基因的结构分析
§2.2.4 甘菊DFL基因组序列和Southern杂交分析
§2.3 讨论
第三章 DFL基因组织特异性表达功能鉴定
§3.1 材料和方法
§3.1.1 材料
§3.1.2 方法
§3.1.2.1 甘菊花芽的形态解剖和显微观察
§3.1.2.2 Northern blotting
§3.1.2.3 RT-PCR半定量检测甘菊DFL基因在不同组织中表达特征
§3.1.2.4 DIG标记的原位杂交
§3.2.结果
§3.2.1 甘菊成花时的形态变化
§3.2.2 甘菊DFL基因的表达特性分析
§3.2.2.1 甘菊中各个组织器官中DFL基因的表达分析
§3.2.2.2 探针质量的控制
§3.2.2.3 供原位杂交的组织切片的制备
§3.2.2.4 DFL在mRNA中的表达模式分析
§3.3 讨论
第四章 DFL导入烟草的试验分析
§4.1 材料
§4.2 方法
§4.2.1 表达载体的构建
§4.2.2 叶盘法转化烟草外植体
§4.2.3 转基因烟草GUS基因表达活性的组织化学染色
§4.2.4 转基因烟草PCR鉴定分析
§4.3 结果与讨论
结论
参考文献
附录 甘菊基因组序列
图版
个人简介
导师简介
致谢
发布时间: 2005-07-12
参考文献
- [1].甘菊BADH基因启动子的克隆及瞬时表达分析[D]. 刘振林.北京林业大学2006
- [2].甘菊NAC基因的功能研究及对露地菊花的遗传转化[D]. 董凤丽.东北林业大学2014
- [3].甘菊响应盐诱导的分子机理研究[D]. 黄河.北京林业大学2012
- [4].短日照诱导甘菊成花转变的分子机理[D]. 付建新.北京林业大学2014
- [5].甘菊成花相关基因表达模式和功能的研究[D]. 王翊.北京林业大学2013
- [6].甘菊BADH基因启动子功能鉴定及诱导型启动子的分离[D]. 曹华雯.北京林业大学2010
相关论文
- [1].甘菊成花相关基因表达模式和功能的研究[D]. 王翊.北京林业大学2013
- [2].DFL基因在甘菊中的转化与表达研究[D]. 丁焱.北京林业大学2009
- [3].甘菊BADH基因启动子功能鉴定及诱导型启动子的分离[D]. 曹华雯.北京林业大学2010
- [4].菊花花器官cDNA文库的构建及DgGA20ox基因克隆与表达分析[D]. 缪恒彬.南京农业大学2009
- [5].果树提早开花的分子生物学基础研究[D]. 刘淑芳.浙江大学2001
- [6].银杏LEAFY同源基因的分离克隆及其相关基础研究[D]. 张建业.浙江大学2002
- [7].甘菊BADH基因启动子的克隆及瞬时表达分析[D]. 刘振林.北京林业大学2006
- [8].蓝色花形成关键基因的分离及其表达分析[D]. 孟丽.北京林业大学2006
- [9].根癌农杆菌介导的AP1基因转化菊花的研究[D]. 吕晋慧.北京林业大学2005
- [10].菊花花色形成的表型分析[D]. 白新祥.北京林业大学2007