高羊茅褐斑病的病原学及防治技术研究

论文摘要

褐斑病是一种重要的草坪病害,常在草坪上造成大块褐色或黄色的病斑。严重影响草坪景观,破坏草坪质量。目前对该病的研究仍仅限于病害的调查和初步的化学防治,国内还未见有较系统的研究报道。本研究旨在确定引起高羊茅褐斑病的病原,了解病菌的寄主范围、生物学特性、病菌对高羊茅的侵入过程以及进行杀菌剂的盆栽药效试验。研究结果如下:从华中农业大学的高羊茅发病植株叶片上分离菌株Rhizoctonia sp.,用菌丝悬浮液接种高羊茅叶片进行致病性测定,证实Rhizoctonia sp.为致病菌。该菌在PDA培养基上培养2d后,菌落稀疏呈毡状,菌丝从白色到浅黄色、灰色,成熟时略呈褐色,直径4-13μm,具直角分枝,菌丝分隔处有缢缩。新生菌丝细胞为多核。菌核颜色从浅白到灰色、褐色或黑色;圆形或不规则形,单生或聚生,绒毛状。rDNA-ITS测序结果与GeneBank中的序列进行同源性比较发现菌株与Rhizoctoniasolani的同源性最高,达99%。根据形态学特征和分子鉴定结果,确定该病原菌为Rhizoctonia solani。寄主范围测定结果表明,该菌可侵染狗牙根、黑麦草、高羊茅、早熟禾、水稻、小麦、玉米、包菜、棉花、辣椒和白菜型油菜。来自于高羊茅、水稻、玉米、小麦上的4种丝核菌交互接种结果表明,除禾谷丝核菌在28℃对4种植物不能致病,其它3种丝核菌均可对4种植物进行交互侵染。病原菌生物学特性研究结果表明,该菌株在10-30℃的范围内均能生长,30℃为菌丝生长最适温度,36h后菌落直径达5.05cm。病菌在pH值为4-12的PDA培养基上菌丝均能生长,其中以pH=7生长最快,36h菌落直径为6.3cm。病菌能够有效利用多种碳源和氮源,但不同碳和氮源对病原菌菌丝生长有显著的影响。以淀粉为碳源和以酵母膏为氮源时菌丝生长最快,6d后菌丝干重分别为0.4151g和0.5276g。病原菌菌丝和菌核的致死温度分别为50℃和55℃,10min。用菌丝块对离体高羊茅叶片接种,对不同时间点样品进行组织透明、染色,观察病原菌对寄主植物的侵染过程。结果表明:接种3h后,R.solani菌丝在叶片上纵向生长,然后形成侵染垫或裂状附着胞,侵染垫由分枝菌丝聚合形成,裂状附着胞由顶端具有圆裂片的短的、肿胀分枝组成。通常病菌可以通过表皮和气孔两种途径侵入寄主,其中以穿透表皮直接侵入入主,接种6h后,在叶表皮细胞中发现有少量侵入菌丝;接种48h,叶片呈水浸状腐烂。PDA平板抑菌实验结果表明,供试五种药剂在设置的不同浓度下对病原菌的生长都有一定的抑制作用,其中30%爱苗乳油和40%福星乳油对菌丝生长有很好的抑制效果,而5%井冈霉素可溶性粉剂抑制效果最差。盆栽药效试验结果表明,在发病前施药的处理中,以5%井冈霉素和20.67%万兴乳油防病效果最好,防效分别为73.67%和70.2%;在发病后施药处理中,以30%爱苗乳油和40%福星乳油防病效果最好,防效分别为68.48%和61.57%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 草坪与草坪病害
• 2 褐斑病的病原学研究
• 2.1 草坪禾草褐斑病的症状
• 2.2 丝核菌的形态学分类
• 2.3 丝核菌的生物学特性研究
• 3 植物病原菌侵染过程的观察
• 4 草坪褐斑病防治技术研究
• 4.1 农业防治
• 4.2 选用抗病品种
• 4.3 药剂防治
• 5 研究目的与意义
• 第二章 高羊茅褐斑病的病原鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 高羊茅褐斑病样本采集、菌株的分离培养与纯化
• 1.1.1 高羊茅草坪褐斑病样本采集
• 1.1.2 病原菌的分离培养
• 1.1.3 分离菌株的纯化
• 1.2 病原菌致病性测定
• 1.2.1 高羊茅草的种植
• 1.2.2 菌丝悬浮液接种叶片
• 1.2.3 菌丝块贴茎接种
• 1.2.4 病原菌的再分离
• 1.3 病原菌的形态学鉴定
• 1.3.1 菌落形态、菌丝及菌核的形态观察
• 1.3.2 菌丝细胞核数目的观察
• 1.3.3 形态学鉴定依据
• 1.4 病原菌rDNA-ITS序列分析
• 1.4.1 菌丝体的培养、收集
• 1.4.2 DNA提取
• 1.4.3 扩增引物
• 1.4.4 PCR反应体系与反应条件
• 1.4.5 序列分析
• 1.5 病原菌寄主范围的测定
• 1.5.1 供试植物及来源
• 1.5.2 接种方法
• 1.6 不同寄主来源的丝核菌对四种禾本科植物的致病力比较
• 1.6.1 供试菌株及来源
• 1.6.2 供试作物与品种
• 1.6.3 接种方法
• 1.6.4 病害严重度分级标准及病情指数计算方法
• 2 结果与分析
• 2.1 致病性测定
• 2.1.1 菌丝悬浮液接种
• 2.1.2 菌丝块贴茎接种
• 2.2 病原菌形态学鉴定
• 2.2.1 PDA培养基上的菌落、菌丝和菌核的形态特征
• 2.2.2 菌丝细胞核数目的观察
• 2.2.3 形态学鉴定
• 2.3 DNA-ITS序列分析
• 2.4 寄主范围的测定
• 2.5 不同寄主来源的丝核菌对四种禾本科植物的致病力比较
• 2.5.1 同种病原菌对不同作物的致病力比较
• 2.5.2 不同寄主来源病原菌对同种作物的致病力比较
• 3 结论与讨论
• 第三章 高羊茅褐斑病病原菌生物学特性的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 不同温度对病原菌菌丝体生长的影响
• 1.2 不同pH值对病原菌菌丝体生长的影响
• 1.3 不同碳源对病原菌菌丝生长的影响
• 1.4 不同氮源对病原菌菌丝生长的影响
• 1.5 菌丝体与菌核的致死温度测定
• 1.6 数据统计与分析
• 2 结果与分析
• 2.1 不同温度对病原菌菌丝生长的影响
• 2.2 不同pH值对病原菌菌丝生长的影响
• 2.3 不同碳源对病原菌菌丝生长的影响
• 2.4 不同氮源对病原菌菌丝生长的影响
• 2.5 菌丝体与菌核的致死温度测定
• 3 结论与讨论
• 第四章 立枯丝核菌对高羊茅叶片侵染过程的观察
• 1 材料与方法
• 1.1 供试的寄主植物
• 1.2 菌丝块离体接种
• 1.3 接种组织的染色与保存
• 1.4 立枯丝核菌（R.solani）侵染过程的观察
• 2 结果与分析
• 2.1 侵入前菌丝体在叶片组织表面的生长情况
• 2.2 菌丝体在叶片组织表面的侵入情况
• 2.3 病原菌侵入组织后的扩展情况
• 3 结论与讨论
• 第五章 高羊茅褐斑病盆栽药效试验
• 1 材料与方法
• 1.1 室内药剂筛选
• 1.1.1 供试药剂及浓度
• 1.1.2 药剂对病原菌的室内毒力测定
• 1.1.3 数据分析
• 1.2 室外盆栽药效试验
• 1.2.1 供试植物
• 1.2.2 供试药剂
• 1.2.3 接种体准备
• 1.2.4 处理方法
• 1.2.5 病害调查及防治效果计算
• 2 结果与分析
• 2.1 室内不同药剂对病原菌的毒力测定
• 2.2 盆栽药效测定
• 3 结论与讨论
• 参考文献
• 致谢