中国绵羊群体β3-AR基因多态性研究

论文摘要

为了分析中国绵羊群体β3-肾上腺素受体基因的遗传特点,采用PCR-SSCP方法及克隆测序技术,对湖羊、小尾寒羊、滩羊、岷县黑裘皮羊和藏羊5个中国绵羊品种419个样品中的β3-AR基因内含子中一段263bp耐寒性相关区域进行遗传多态性分析。结果显示,在所测中国绵羊群体中共发现13个β3-AR基因的特异性条带类型,其中5个为新的条带类型。5类新带型克隆测序结果表明,它们为新的等位基因。新序列提交到Genbank,依次命名为等位基因I-M（EU371403-EU371407）。序列比对发现了2个新的SNPs和1个新的碱基删除位点,将该多态区域由原有的8个SNPs增加到了10个。中国绵羊群体中,来自寒冷地区绵羊（甘加,欧拉,乔科,小尾寒羊和美利奴滩寒杂交羊）的主要等位基因是C,其次为等位基因A或B（乔科羊）,其中在来自于西北牧区藏羊的三个品种中优势等位基因C的频率均超过了50%。与之相反,在来自于江苏的湖羊品种中等位基因A的频率超过了等位基因C。对全部所测中国品种等位基因频率进行平均计算:等位基因A为22.0%,B为14.0%,C为49.0%,D为0.1%,E为5.7%,F为2.4%,G为1.3%,H为1.9%,I为2.1%,J为0.3 %,K为0.1%,L为0.1%,M为0.2%。结果表明,中国绵羊群体在β3-肾上腺素受体基因位点具有高度的多态性,等位基因间具有明显的遗传差异;由藏绵羊和湖羊的主要等位基因差异可以得知等位基因频率的分布与样本所属地域环境有关;在中国绵羊群体中等位基因C为主体,其次是等位基因A。新西兰绵羊群体中等位基因A占主导地位,其频率为60.0%;其次是等位基因C,频率为20.3%。由于新西兰对当地绵羊的耐寒性分子标记辅助选育开展的较早,所得基因频率的多态性不及中国绵羊群体,另一方面,结果证实中国绵羊在β3-AR基因座位上具有开展分子标记-耐寒性选育的潜力。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 1 产热机理
• 2 肾上腺素受体和产热调控
• 2.1 不同类型的脂肪组织
• 2.2 棕色脂肪组织的生理功能
• 2.3 棕色脂肪组织中的ARs
• 2.3.1 β3-AR 基因结构
• 2.3.2 β3-AR 功能学
• 3 绵羊β3-AR 的等位基因型与耐寒性
• 第二部分 实验研究
• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 DNA 提取
• 1.2 PCR
• 1.3 扩增体系
• 1.4 扩增条件
• 1.5 条件优化
• 1.6 SSCP
• 1.6.1 配胶
• 1.6.2 银染
• 1.6.3 等位基因辨型
• 1.7 目的基因克隆
• 1.7.1 PWO PCR
• 1.7.2 连接
• 1.7.3 转化
• 1.7.4 克隆选取
• 1.7.5 小剂量制备及克隆检测
• 1.8 SSCP-克隆保真性检测
• 1.9 测序与序列分析
• 2 结果
• 2.1 电泳结果
• 2.2 不同绵羊品种等位基因频率
• 2.3 等位基因序列和频率
• 2.4 β3-AR 等位基因序列比对
• 3 讨论
• 3.1 SSCP
• 3.2 内含子作用
• 3.3 多态性
• 3.4 频率对比
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附1 部分测序图谱
• 附2 序列比对
• 附3 PCR4 Blunt-Topo 载体图谱
• 作者简介
• 导师简介