补肾中药组分淫羊藿苷对哮喘小鼠嗜酸粒细胞凋亡的影响

论文摘要

目的观察补肾中药组分淫羊藿苷对支气管哮喘小鼠肺内嗜酸粒细胞凋亡的影响。观察补肾中药组分淫羊藿苷对嗜酸粒细胞凋亡相关细胞因子IL-3、IL-5、GM-CSF,相关基因蛋白Bcl-2、Bax及转录因子NF-κB p65蛋白表达的影响。从细胞凋亡的角度探讨补肾中药组分淫羊藿苷减轻哮喘气道炎症的作用机理。方法（1）动物：健康雌性6周龄Balb/c小鼠48只（体重16-18g）,按随机数字表法随机分为6组：生理盐水对照组（A组）、哮喘组（B组）、地塞米松组（C组）、淫羊藿苷低剂量组（D组）、淫羊藿苷中剂量组（E组）、淫羊藿苷高剂量组（F组）,每组8只。（2）药物：淫羊藿苷,上海融禾医药科技有限公司产品,批号：091209。（3）造模方法：除正常组外,其它各组于实验第1天和第8天腹腔内注射混悬液0.5ml/只（含卵蛋白100ug和氢氧化铝凝胶0.5m1）,使小鼠致敏。致敏后第15天开始用1%的卵蛋白雾化吸入激发,隔天一次,每次30min,连续6周,共激发21次。（4）给药方法：地塞米松组,于每次雾化吸入激发前1h腹腔注射地塞米松；淫羊藿苷组,在每次雾化吸入激发前1h分别腹腔注射不同剂量淫羊藿苷（25mg/kg,50mg/kg,100mg/kg）；正常对照组和哮喘模型组：以等体积的生理盐水于雾化吸入前1h腹腔注射。（5）检测方法：于最后一次哮喘激发24h内麻醉小鼠采取标本。肺组织HE染色；观察淫羊藿苷对小鼠BALF中嗜酸粒细胞计数的影响；ELISA法检测血清OVA-IgE; Luminex 200检测血清细胞因子IL-3、IL-5、GM-CSF含量；含量TUNEL法检测肺组织嗜酸粒细胞凋亡；免疫组化法检测肺组织Bcl-2、Bax基因蛋白表达；Western Blot法检测肺组织NF-κB p65蛋白表达。结果（1）小鼠激发后症状改变：模型组小鼠在哮喘激发过程中出现烦躁、打喷嚏、头面部瘙痒、呼吸急促、腹肌收缩、伏卧不动、大小便失禁等过敏反应,反复发作后出现毛发干枯,体重增长缓慢。正常对照组和用药组症状表现较模型组轻。（2）小鼠气道反应性（Penh%）：正常对照组小鼠多在雾化吸入Mch 25-50mg/ml时出现呼吸频率加快,腹式呼吸,流涎等不同程度的紫绀等呼吸困难症状；哮喘模型组小鼠可较早出现呼吸困难症状,多在Mch 6.25-12.5mg/ml的浓度下出现,尤其Mch浓度为12.5mg/ml时（P<0.05）;地塞米松组组、淫羊藿苷组小鼠Penh%下降,气道反应性降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。（3）小鼠肺组织病理学：哮喘模型组小鼠支气管、血管粘膜下和周围肺组织有明显的炎性细胞浸润,主要以嗜酸粒细胞为主。地塞米松组有轻度炎症变化。淫羊藿苷低、中、高剂量组较哮喘组炎症变化明显减轻（4）小鼠血清中OVAO-IgE含量：与正常对照组（3.91±0.32）相比,哮喘模型组（76.52±4.91）小鼠血清中OVA-IgE含量显著升高（P<0.05）；地塞米松组（58.28±5.78）、淫羊藿苷低剂量组（59.66±5.48）、淫羊藿苷中剂量组（54.92±7.85）、淫羊藿苷高剂量组（55.31±4.25）小鼠血清OVA-IgE含量显著低于哮喘模型组（P<0.05）；地塞米松组小鼠血清OVA-IgE含量低于淫羊藿苷低、中、高剂量组（P<0.05）。（5）小鼠肺泡灌洗液嗜酸粒细胞计数：与正常对照组（0.86±0.17）比较,哮喘模型组（3.12±0.29）小鼠BALF中嗜酸粒细胞数显著增加（P<0.05）；与哮喘模型组比较,地塞米松组（2.35±0.25）、淫羊藿苷低（2.61±0.21）、淫羊藿苷中剂量组（2.34±0.22）、淫羊藿苷高剂量组（2.51±0.27）小鼠肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞的数量减少（P<0.05）。（6）各组小鼠血清细胞因子GM-CSF、IL-5、IL-3变化：各组小鼠血清GM-CSF水平：与正常对照组（6.82±0.72）比较,哮喘组（12.00±1.83）、地塞米松组（8.76±2.07）、淫羊藿苷低剂量（9.16±0.84）、淫羊藿苷中剂量组（12.79±4.62）GM-CSF含量明显升高（P<0.05）；与哮喘组比较,用药组除淫羊藿苷中剂量组外,其余各组（地塞米松组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷高剂量组（6.91±0.92））GM-CSF含量均降低（P<0.05）；各组小鼠血清工L-5含量：与正常对照组相比,哮喘模型组小鼠血清中IL-5有升高的趋势；与哮喘模型组比较,地塞米松组小鼠血清中IL-5含量有下降的趋势;淫羊藿苷低、中、高剂量组小鼠血清中IL-5含量有下降的趋势；各组小鼠血清IL-3未检测出。（7）各组小鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡指数比较：正常对照组（2.4±0.8）小鼠肺组织及气道壁极少嗜酸粒细胞凋亡。与正常对照组比较,哮喘模型组（4.6±1.3）嗜酸粒细胞凋亡指数显著降低（P<0.05）；与模型组比较,地塞米松组（25.0±6.4）、淫羊藿苷低剂量组（16.4±6.1）、淫羊藿苷中剂量组（20.8±4.5）、淫羊藿苷高剂量组（18.9±4.9）小鼠的肺组织及气道壁嗜酸粒细胞凋亡指数显著增高（P<0.05）。（8）各组小鼠肺组织Bcl-2、Bax基因蛋白的表达各组小鼠肺组织Bcl-2免疫组化染色结果比较：正常对照组（10.83±2.23）小鼠肺组织及气道壁Bcl-2阳性面积较低,模型组（54.33±8.89）小鼠肺组织及气道表达Bcl-2的阳性面积显著高于正常组对照组（P<0.05）；与模型组比较,各治疗组小鼠的肺组织及气道Bcl-2阳性面积显著降低（P<0.05）；淫羊藿苷低剂量组（35.50±9.22）小鼠肺组织及气道Bcl-2阳性面积高于地塞米松组（20.67±10.07）（P<0.05）；地塞米松组Bcl-2阳性面积低于淫羊藿苷中剂量组（23.67±9.52）、淫羊藿苷高剂量组（26.50±8.64）,但差异无统计学意义（P>0.05）。各组小鼠肺组织Bax免疫组化染色结果比较：正常对照组（46.67±12.11）小鼠肺组织及气道壁Bax阳性面积比率较高,与正常组比较,模型组（12.33±3.78）小鼠肺组织及气道Bax阳性面积显著降低（P<0.05）；各治疗组小鼠的肺组织及气道壁Bax阳性面积显著高于模型组（P<0.05）；地塞米松组（38.83±6.15）小鼠肺组织及气道壁Bax阳性面积高于淫羊藿苷低剂量组（26.33±7.58）（P<0.05）；淫羊藿苷中剂量组（33.67±7.28）、淫羊藿苷高剂量组（32.17±6.91）小鼠肺组织及气道壁Bax阳性面积与地塞米松组比较差异无统计学意义（P>0.05）。各组小鼠Bcl-2/Bax表达比值比较：各组小鼠与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠肺组织有明显的Bcl-2蛋白高表达、Bax蛋白低表达,Bcl-2/Bax比值较高（P<0.05）；地塞米松组和淫羊藿苷低、中、高剂量组小鼠肺组织Bcl-2/Bax比值均低于哮喘模型组（P<0.05）；淫羊藿苷低、中、高剂量剂量组Bcl-2/Bax比值低于地塞米松组,淫羊藿苷低剂量组与地塞米松组比较差异有统计学意义（P<0.05）。（9）各组小鼠肺组织NF-K B p65蛋白的表达与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠肺组织中NF-κB p65蛋白的表达增加；地塞米松组小鼠肺组织中NF-κB p65蛋白表达减低；与模型组比较,淫羊藿苷低、中、高剂量组哮喘小鼠肺组织中NF-K B p65蛋白的表达下降；其中,淫羊藿苷中剂量组小鼠肺组织NF-κB p65蛋白表达量最低。结论通过对上述实验结果的分析,我们认为补肾中药组分淫羊藿苷可以显著促进哮喘小鼠肺内嗜酸粒细胞凋亡,并可能下调抑嗜酸粒细胞凋亡的细胞因子工L-5、GM-CSF的水平,下调抗凋亡基因蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡基因蛋白Bax的表达,下调转录因子NF-κB p65蛋白的表达,促进哮喘气道嗜酸粒细胞凋亡,减少嗜酸粒细胞浸润,减轻哮喘气道炎症,其作用与地塞米松类似,显示其有类激素样作用。淫羊藿苷中高剂量组对大部分指标的作用强于淫羊藿苷低剂量组,表明补肾中药组分淫羊藿苷对嗜酸粒细胞凋亡的促进作用可能存在一定的量效关系。

论文目录

• 缩略词中英文对照
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录一: 综述
• 参考文献
• 附录二: 发表文章及参与课题研究的情况
• 致谢