非洲鸵鸟皮肤抗菌肽的提取及部分功能的研究

论文摘要

本试验以非洲鸵鸟为研究对象,对其皮肤抗菌肽进行了提取和分离,并对其体外抗菌活性和对单个核细胞趋化活性进行了测定以及对雏鸡免疫器官发育和功能的影响进行了动物试验。本试验分为两个部分。系列Ⅰ为:非洲鸵鸟皮肤抗菌肽的分离提取及活性检测皮肤抗菌肽分离提取:将皮肤剪碎,匀浆器研磨,用5%乙酸浸24h,然后通过离心和调PH再离心的方法除掉部分杂蛋白,离心后的上清液过SephadexG-100凝胶柱,分离出的小分子蛋白质。用改良的琼脂糖弥散法对其进行抑菌活性检测,收集具有抑菌活性的洗脱液并冷冻干燥,即为较纯的抗菌肽。用微量肉汤稀释法稀释抗菌肽的冻干粉、过柱后的洗脱液及过柱前的粗提物进行最小抑菌浓度（MIC）的测定。结果表明冻干粉和洗脱液没有测出MIC,而粗提物的最小抑菌浓度为3.2-6.4mg·mL-1。采用琼脂糖平皿中的趋化实验方法对稀释后的抗菌肽冻干粉进行趋化活性的测定。结果表明,皮肤抗菌肽冻干粉在趋化细胞的作用上没用统计学意义（P＞0.01）。MIC试验和趋化试验共同说明了,皮肤抗菌肽结构复杂,其空间结构易受低温和时间等环境的影响而失去抑菌活性和趋化活性。系列Ⅱ为:鸵鸟皮肤抗菌肽对雏鸡免疫器官的影响以1日龄的蛋公鸡为试验对象进行动物实验:选取50只1日龄健康海蓝白商品雏鸡,随机分为两组,每组25只:（1）皮肤防御素实验组（T）,从1日龄饮水中开始加入浓度为1μg·mL-1皮肤抗菌肽。（2）对照组（C）,与T组饮水相同但不加抗菌肽。两组雏鸡隔离饲养,所有雏鸡自由饮水采食。实验组和对照组雏鸡于1、4、7、10、17日龄每组随机抽取5只取材。用免疫器官指数方法进行鸵鸟皮肤抗菌肽对雏鸡免疫器官指数的影响试验。结果表明,实验组与对照组雏鸡体重无统计学差异（P＞0.1）;实验组与对照组的胸腺指数在7日龄时有统计学差异且差异显著（P＜0.05）,脾脏指数在7日龄时差异极显著（P＜0.01）,法氏囊指数在4日龄差异显著（P＜0.05）,其余各日龄的免疫器官指数均无统计学差异.（P＞0.1）.说明鸵鸟皮肤抗菌肽可以促进这些免疫器官的发育,从而增强机体的抵抗力和免疫功能。用酸性a-醋酸萘酯酶测定（酯酶染色）方法进行鸵鸟皮肤抗菌肤对雏鸡免疫系统T琳巴细胞数量的影响试验.结果表明,单位面积ANAE阳性细胞在雏鸡胸腺和脾脏中的表达量在7日龄时实验组与对照组有统计学差异且差异显著（P＜0.05）,单位面积ANAE阳性细胞在雏鸡法氏囊中的表达量在7日龄时实验组与对照组差异极显著（P＜0.01）,,其余各日龄的单位面积ANAE阳性细胞在雏鸡胸腺、脾脏和法氏囊中的表达量均无统计学异（P＞0.1）。说明鸵鸟皮肤抗菌肽可以一定程度上促进T淋巴细胞的增加。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 抗菌肽的研究进展
• 1.1.1 抗菌肽的类型及其结构特点
• 1.1.2 影响抗菌肽活性的因素
• 1.1.3 抗菌肽的作用机理
• 1.1.4 抗菌肽和抗生素的区别
• 1.1.5 抗菌肽研究存在的问题与展望
• 1.2 防御素的研究进展
• 1.2.1 防御素的来源与分类
• 1.2.2 禽类β-防御素的研究进展
• 1.3 防御素在动物免疫应答中的作用
• 1.3.1 防御素在天然免疫应答中的作用
• 1.3.2 防御素在获得性免疫应答中的作用
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 系列Ⅰ 非洲鸵鸟皮肤抗菌肽的提取与活性鉴定
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 系列Ⅱ 鸵鸟皮肤抗菌肽对雏鸡免疫器官的影响
• 3.2.1 材料
• 3.2.2 方法
• 4 结果与分析
• 4.1 系列Ⅰ 鸵鸟皮肤抗菌肽的提取
• 4.1.1 鸵鸟皮肤抗菌肽的提取及其抗菌活性检测试验
• 4.1.2 鸵鸟皮肤抗菌肽的最小抑菌浓度（MIC）测定
• 4.1.3 抗菌肽对单个核细胞的趋化活性试验
• 4.2 系列Ⅱ 皮肤抗菌肽对雏鸡免疫器官的影响
• 4.2.1 皮肤抗菌肽对雏鸡免疫器官指数的影响试验
• 4.2.2 鸵鸟皮肤抗菌肽对雏鸡免疫系统T淋巴细胞数量的影响
• 5 讨论与结论
• 5.1 讨论
• 5.1.1 鸵鸟皮肤抗菌肽的提取与活性检测
• 5.1.2 鸵鸟皮肤抗菌肽对雏鸡免疫器官的影响
• 5.2 结论
• 5.2.1 由本试验可得知以下结论
• 5.2.2 还需要进一步深入研究的内容
• 参考文献
• 英文摘要
• 图版与说明