3种抗瘤中药制剂影响Hela细胞免疫抑制分子分泌的研究

论文摘要

目的:宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤,全球每年约有20万妇女死于此病,严重威胁着妇女的健康及生活质量。目前,在传统的三大疗法基础上,宫颈癌的辅助免疫治疗已成为近年来的研究热点。肿瘤细胞分泌免疫抑制分子抑制免疫功能逃避免疫监视,是肿瘤发生发展的重要机制。研究发现,宫颈癌细胞培养上清具有免疫抑制作用,是其分泌免疫抑制分子所致,报道较多的是转化生长因子（TGF）β、白介素（IL）10及前列腺素（PG）E2等。因此,研究下调肿瘤免疫抑制分子分泌,寻找能够逆转肿瘤免疫抑制的有效药物,是开发抗瘤药物、明确其抗瘤免疫机理和指导临床合理应用的重要方面。中药抗肿瘤是我国抗瘤药物研究的优势领域,本实验选用宫颈癌Hela细胞,检测其经3种抗瘤中药制剂分别作用后免疫抑制分子分泌的变化,初步探讨不同类型中药制剂下调肿瘤免疫抑制与影响肿瘤细胞分泌免疫抑制分子类别的规律,为揭示抗瘤中药作用新机制,进一步开发具有我国自己特色和自主知识产权的抗瘤中药制剂,指导临床合理应用,奠定实验基础和提供理论依据。方法:确定最适宜的肿瘤细胞接种浓度及培养时间后,选用川芎嗪（LHC）、氧化苦参碱（MOX）、青蒿琥酯（ART）3种抗瘤中药制剂,MTT法筛选对肿瘤细胞无直接毒性的最高中药浓度。分别制备不同中药制剂作用48h后的培养上清（分别称为LHC-S、MOX-S、ART-S）,洗涤去除中药制剂,再连续两次用新鲜培液进行48h再培养的Hela细胞上清（分别称为LHC-S1、MOX-S1、ART-S1;LHC-S2、MOX-S2、ART-S2）,以及不经中药制剂作用的相应同步培养的Hela细胞培养上清作对照（分别称为Control-S、Control-S1、Control-S2 ）。定量ELISA法测定各上清中TGF-β1、IL-10的含量,紫外分光光度法测定PGE2的A278值。将中药制剂作用后再培养的Hela细胞免疫抑制分子含量列表进行统计分析,确定抗瘤中药制剂下调Hela细胞免疫抑制的相应靶分子。结果:1经MTT法确定实验用Hela细胞接种浓度为2×105/mL,培养时间为48h;2经MTT法确定实验用对肿瘤细胞无直接毒性作用的中药制剂最高浓度分别为:LHC7.80mg/L、MOX39.06mg/L、ART3.13mg/L;3未经中药制剂作用的Hela细胞可稳定分泌所测的3种免疫抑制分子,以TGF-β1含量最高,可达（989.226±34.836 ）ng/mL,IL-10的含量为（3.768±0.145）pg/mL,检测PGE2的A278值为（0.262±0.037）。经LHC作用后,LHC-S与Control-S相比,TGF-β1、IL-10的含量及PGE2的A278值均明显降低（分别为18.791±2.368 ,P<0.001;2.982±0.117,P<0.05;0.148±0.037,P<0.05）,以TGF-β1降低最著,仅为Control-S含量的1.90%, IL-10为Control-S含量的87.90%,PGE2为Control-S A278值的56.49%;其第一次48h再培养上清（LHC-S1）与LHC-S相比,TGF-β1含量继续显著降低（2.398±0.458,P<0.01）,仅为Control-S1的0.25%,IL-10含量无明显变化（2.871±0.108,P>0.05 ）,PGE2的A278值继续显著降低（0.091±0.007,P <0.01）,为Control-S1的34.73%;其第二次48h再培养上清（LHC-S2）与LHC-S1相比,TGF-β1含量仍继续显著降低（0.595±0.031,P <0.001）,仅为Control-S2中含量的0.06%,IL-10含量开始显著回升（3.232±0.116,P <0.05）,但未达到Control-S2对照水平,PGE2的A278值开始显著回升（0.144±0.042,P <0.05）,为Control-S2的56.25%。经MOX作用后的Hela细胞,MOX-S与Control-S相比,TGF-β1含量明显降低（2.561±0.789,P <0.001）,仅为Control-S含量的0.26%,IL-10含量及PGE2的A278值无显著变化（分别为3.304±0.085,P>0.05;0.215±0.057,P>0.05 ）;其第一次48h再培养上清（MOX-S1）与MOX-S相比,TGF-β1含量继续显著降低（0.305±0.035,P <0.001）,仅为Control-S1含量的0.03%,IL-10含量及PGE2的A278值无显著变化（分别为3.492±1.008,P>0.05;0.186±0.045,P>0.05 ）;其第二次48h再培养上清（MOX-S2）与MOX-S1相比,TGF-β1含量显著回升（1.382±0.389,P <0.001）,为Control-S2含量的0.14%,IL-10含量及PGE2的A278值无显著变化（分别为3.047±0.239,P>0.05;0.151±0.035,P>0.05 ）。经ART作用后的Hela细胞,ART-S与Control-S相比,TGF-β1的含量明显降低（2.859±0.520,P <0.001）,仅为Control-S含量的0.29%, IL-10的含量显著降低（3.010±0.217,P<0.05）,为Control-S含量的88.76%,PGE2的A278值显著降低（0.149±0.013,P <0.05）,为Control-S的58.43%;其第一次48h再培养上清（ART-S1）与ART-S相比,TGF-β1继续降低（0.009±0.001,P <0.001）,仅为Control-S1含量的0.00008%, IL-10的含量显著降低（3.121±0.137,P <0.05）,为Control-S1的90.99%,PGE2的A278值继续显著降低（0.138±0.032,P <0.05）,为Control-S1的52.67%;其第二次48h再培养上清（ART-S2）与ART-S1相比,TGF-β1含量显著回升（0.576±0.032,P <0.001）,为Control-S2含量的0.06%, IL-10含量及PGE2的A278值无显著变化（分别为3.207±0.082,P>0.05;0.186±0.013,P>0.05）。结论:1 Hela细胞可稳定分泌所测3种免疫抑制分子。2所试的川芎嗪、氧化苦参碱及青蒿琥酯3种抗瘤中药制剂均可下调Hela细胞分泌的免疫抑制分子TGF-β1的含量,其中以青蒿琥酯下调作用最强;川芎嗪和青蒿琥酯可下调IL-10及PGE2的含量,其中以川芎嗪下调作用最强。3 TGF-β1可能是Hela细胞的优势分泌免疫抑制分子。4下调肿瘤免疫抑制分子分泌可能是川芎嗪、氧化苦参碱及青蒿琥酯的抗瘤免疫作用新机制。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 3种抗瘤中药制剂影响Hela 细胞免疫抑制分子分泌的研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 参与妇科三大恶性肿瘤免疫抑制的免疫抑制分子
• 致谢
• 个人简历