论文摘要
山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉。临床上多用山萸肉、酒山萸肉。山萸肉长于敛汗固脱,用于自汗或大汗不止,阴虚盗汗;经酒蒸制后,补益肝肾作用增强,多入滋补方剂,常用于眩晕耳鸣,阳痿遗精,遗尿,尿频,月经过多或崩漏,腰部酸痛等。其主要化学成分为有机酸、多糖、环烯醚萜苷等成分。本论文旨在研究山茱萸炮制前后,其内在的化学成分的变化,寻找炮制过程中发生变化（含量改变、新增或消失）的活性成分,来阐明山茱萸炮制前后药效的差异。本论文分五个部分对山茱萸炮制前后的药效学及活性成分进行研究。第一部分:山茱萸炮制前后药效学比较研究比较了山茱萸炮制前后对免疫低下小鼠免疫功能的影响,对肾阴虚模型小鼠的影响,对急性肝损伤保护作用的影响。结果表明,山茱萸制品水煎液高剂量对小鼠特异性体液免疫功能的增强作用显著增强;山茱萸制品水煎液高剂量能延长肾阴虚小鼠负重游泳时间、耐缺氧时间,提高肾阴虚小鼠血清中SOD活力,降低MDA含量;山茱萸炮制后水煎液中剂量对急性肝损伤保护作用增强。第二部分:山茱萸炮制前后成分分析。包括:1山茱萸炮制前后RP-HPLC-DAD图谱比较利用RP-HPLC-DAD分析比较山茱萸炮制前后图谱的差异:山茱萸炮制以后,没食子酸和5-羟甲基糠醛的含量显著增加;莫诺苷,獐牙菜苷和马钱素的含量则下降;另外,未知化合物1的含量明显增加,未知化合物2的含量则有所下降。2未知成分的确定利用LC-MS分析两个化合物,得到了一些可能的分子式,尚不能断定为何化合物。利用制备液相,制备分离得到了其中一个化合物（未知化合物2）,经13C-NMR,1H-NMR以及2D C-H COSY检测,确定该化合物为山茱萸裂苷。3山茱萸炮制前后主要有效成分的含量变化利用RP-HPLC-DAD法同时测定了山茱萸生、制品中6种成分的含量;同时,也考察了水煎和甲醇超声两种提取方法对成分含量的影响。第三部分:山茱萸裂苷的药效学研究研究得知,山茱萸裂苷作用细胞24 h后对巨噬细胞增殖有促进作用,作用48 h、72 h后对巨噬细胞增殖则表现抑制作用;对星形胶质细胞和肾小球系膜细胞均具有保护作用第四部分:山茱萸生、制品的指纹图谱研究通过优化液相条件,建立了12批山茱萸生、制品的HPLC指纹图谱共有模式,通过比较分析生品发现有19个共有色谱峰,制品有23个共有色谱峰,通过与对照品对照,分别确认了5、6个共有峰的归属。第五部分:山茱萸炮制前后血清药物化学及血清药理学的初步研究。建立了适合山茱萸在灌胃后大鼠体内分析的色谱方法,通过给药后0～240min大鼠血清药物指纹图谱分析,山茱萸中5-HMF、莫诺苷、马钱素等成分入血,没食子酸、獐牙菜苷、山茱萸裂苷等没有检出。血清药理学研究表明,山茱萸生、制品的含药血清,对H2O2所致肝细胞损伤均有明显的保护作用,且制品含药血清数值优于生品;对CdCl2所致肾小球系膜细胞损伤也都具有明显的保护作用,且制品含药血清的作用略优于生品含药血清。
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