mTOR抑制剂RAD001联合吉非替尼对EGFR野生型吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌细胞株生长的影响

论文摘要

目的:研究RAD001联合吉非替尼对原发性吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌NCI-H460、NCI-H661细胞株增殖和凋亡的影响。方法:以EGFR状态相同而PIK3CA、K-RAS状态不同的人非小细胞肺癌细胞系NCI-H460及NCI-H661细胞株为研究对象。NCI-H460细胞的PIK3CA和K-RAS基因均为突变型,NCI-H661细胞的PIK3CA和K-RAS基因均为野生型。两株细胞均对吉非替尼耐药。实验分空白对照组、吉非替尼组、RAD001组、吉非替尼和RAD001联合用药组。药物作用72h后采用MTT实验检测两株细胞各组的生长抑制率,并计算合用指数CI;采用流式细胞仪检测两株细胞各组的凋亡率。药物作用24h后Western Blot检测各组细胞mTOR下游p70S6K及p-p70S6K蛋白表达水平。结果:1.MTT实验结果:在肺癌NCI-H460细胞中,单药吉非替尼的IC50为19.46±0.0.17μM,单药RAD001的IC50为86.80±1.64nM,两药合用后吉非替尼的IC50为0.51±0.32μM/nM,较单药吉非替尼明显降低,两药合用指数（CI）为0.0326。在肺癌NCI-H661细胞中,单药吉非替尼的IC50为34.96±0.28μM,单药RAD001的IC50为23.72±1.14 nM,两药合用后吉非替尼的IC50为10.14±2.17μM/nM,较单药吉非替尼明显降低,两药合用指数（CI）为0.8419。两株细胞中的合用指数均小于1,表明有协同作用。2.流式细胞仪检测结果:在肺癌NCI-H460细胞中,空白对照组凋亡率为2.11%,吉非替尼组为11.44%,RAD001组为5.27%,两药合用组为13.20%。在肺癌NCI-H661细胞中,空白对照组凋亡率为3.59%,吉非替尼组为8.62%,RAD001组为7.40%,两药合用组为14.34%。两药合用组凋亡率与单药组相比均升高。3.Western Blot检测结果:NCI-H460细胞空白组p-p70S6K蛋白表达水平较NCI-H661细胞空白组升高。两株细胞的RAD001组及两药联合组p-p70S6K蛋白表达水平均较空白组降低。结论:1.RA001可逆转EGFR野生型非小细胞肺癌细胞株原发性吉非替尼耐药。2.RAD001逆转EGFR野生型非小细胞肺癌细胞株原发性吉非替尼耐药的效果与K-RAS和PIK3CA基因突变状态有关。3. PIK3CA突变和K-RAS突变共同激活PI3K/AKT/mTOR通路。

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