论文摘要
黄曲霉毒素B1具有很强的毒性,1988年被国际癌症机构列为A类致癌物质。黄曲霉毒素会降低动物的产奶产蛋量,危害人类的健康,对经济也造成一定的影响。为了对黄曲霉毒素进行有效监控,必须有灵敏、特异、快速、可靠、容易普及的方法进行检测。本项研究应用杂交瘤技术制备抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体,为建立ELISA方法检测AFTB1奠定基础。本研究改进江湖等人报道的EDC法制备了检测抗原AFTB1-OVA。接下来实施免疫方案,初次免疫为AFTB1-BSA结合完全弗氏佐剂,足垫免疫,间隔四周后结合不完全弗氏佐剂加强免疫小鼠,最后一次免疫后三周通过尾静脉或腹腔冲击免疫小鼠,三到四天后取脾进行细胞融合。在免疫方案实施的同时,确立检测方法,以棋盘滴定试验确定抗原1:100包被,免疫鼠血清1:5000稀释作为阳性对照（PC）,正常鼠血清1:100稀释作为阴性对照（NC）,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG1:400稀释。利用杂交瘤技术将免疫Babl/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性细胞株。经过八次融合,多次筛选,都得不到稳定的阳性细胞株,故而进行了多克隆抗体的制备。通过免疫家兔,获得阳性血清,以正辛酸-硫酸铵沉淀方法纯化血清,用免疫印迹实验证明了该血清是抗黄曲霉毒素B1的多抗,间接ELISA法测得纯化后的多抗效价为2.56×105,间接性竞争法测得该抗体对黄曲霉毒素B1的最低检出浓度为0.05μg/ml。