复合扩增荧光标记STR-PCR定量检测技术在异基因造血干细胞移植术中的应用

论文摘要

目的利用微卫星片段（Short tandem repeat ,STR）遗传多态性的特点,结合聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction,PCR）和毛细管电泳技术,采用复合扩增荧光标记短串联重复序列STR-PCR结合毛细管电泳检测15个STR基因座和1个性别位点的方法,建立异基因造血干细胞移植术（Allogeneic stem cell transplantation,Allo-HSCT）后嵌合体组成的定量检测方法。分别检测骨髓（Bone marrow transplantation,BMT）联合外周血造血干细胞术（Peripheral blood stem cell transplantation, PBSCT）或单纯PBSCT后30天造血细胞嵌合体组成情况以及非血缘脐血移植（Unrelated Cord blood transplantation, UCBT）后30天内造血细胞嵌合体的动态变化,判断移植物植入情况,同时在移植术后长期跟踪检测造血细胞嵌合体组成以评价疾病状态、预测疾病转归等,并将此方法和其他临床检测手段相比较,观察其实际临床应用价值。方法建立识别个体的荧光标记复合PCR扩增STR位点结合毛细管电泳检测嵌合体方法,使用Promage公司的PowerPlex16个体识别试剂盒扩增荧光标记多重STR,特异性STR位点选择包括:D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、PentaE、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、FGA 15个基因座和1个性别基因Amelogenin。扩增产物经ABI公司的3100型遗传分析仪进行毛细管电泳,GenScan?等分析软件分析数据,检测异基因造血干细胞移植术后移植受者造血细胞嵌合体组成情况,判断移植物植入情况,同时,在定性检测的基础上,依据毛细管电泳后DNA信息峰曲线下面积的大小,定量计算供者细胞的嵌合率。用此技术检测2006年至2007年间在安徽省立医院血液科接受Allo-HSCT术的44例血液系统恶性肿瘤患者移植后不同时间点造血细胞嵌合体组成情况。35例Allo-HSCT受者（其中33例BMT联合PBSCT、2例PBSCT）检测移植后30天造血细胞嵌合体组成以判断移植物植入情况,9例UCBT患者连续检测移植后30天内（移植后7、14、21、30天）造血细胞嵌合体组成变化,并同时和相应的外周血象比较,以观察移植物的植入规律并提前预测移植效果。移植后定期跟踪检测移植受者造血细胞嵌合体变化以预测移植物永久植入情况和疾病的转归。结果全部移植受者在移植后不同时间点经复合扩增荧光标记STR-PCR定量技术检测造血细胞嵌合体组成中均检测到供者成分。35例BMT/PBSCT受者全部获得造血重建,34例移植受者术后30天经STR-PCR定量技术检测造血细胞嵌合体组成呈完全供者型（Full donor chimera,FDC）,1例63岁ALL患者行减低强度PBSCT,移植后30天嵌合体呈混合嵌合（Mixed chimera,MC）,移植后90天嵌合体呈FDC。9例UCBT受者在移植后不同时间均检测到供者成分,发现获得造血重建的7例移植受者,在移植后7天造血未恢复外周血中嵌合体均呈FDC,而2例未获得造血重建受者移植后7天嵌合体呈MC,移植后30天外周血和骨髓中均未检测到供者基因成分。跟踪随访中,7例骨髓复发患者均提前出现嵌合体中供者成分减低的现象,2例髓外复发患者其嵌合体仍呈FDC。结论1,复合扩增荧光标记STR一PCR结合毛细管电泳技术能准确有效地判断出Allo-HSCT术后早期移植物植入状况,并能连续动态监测移植后移植物永久植入情况,及时预测疾病的转归,为临床早期干预治疗提供可靠的实验依据;2,UCBT后30天内连续检测嵌合体组成情况,在外周血象尚未恢复时（移植后7天）即可提前预测移植物被植入,与沿用的移植成功指标ANC具有很好的关联性,并可揭示脐血移植植入动力学的规律,该技术可作为早期评估UCBT是否成功最灵敏特异的指标。3,该方法灵敏度高、特异性强、标本需要量少、适应范围广,具有很好的临床应用价值。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 前言
• 1 第一部分 复合扩增荧光标记 STR-PCR 定量检测造血细胞嵌合体组成技术的建立
• 1 材料与方法
• 2. 结果判断
• 2 第二部分 复合扩增荧光标记 STR-PCR 定量检测技术在异基因骨髓或外周血造血干细胞移植中的应用
• 1. 临床资料
• 2.试验方法
• 3.结果
• 3 第三部分 复合扩增荧光标记 STR-PCR 定量检测技术在非血缘脐血移植中的应用
• 1. 临床资料
• 2.试验方法
• 3. 结果
• 4 讨论
• 4.1 Allo-HSCT 术后检测造血细胞嵌合体的意义
• 4.2 Allo-HSCT 术后移植物植入检测方法的研究现状
• 4.3 STR-PCR 技术在检测嵌合体方面的优势
• 4.4 STR-PCR 技术在本研究中的应用
• 5 结论
• 6 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献