马晓璐黄子桐张鹤宋平（辽宁省辽阳市食品药品检验所111000）
【中图分类号】R155.5+1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）21-0154-02
【摘要】目的建立高效液相色谱法测定猪血制品中的甲醛含量。方法以2,4-二硝基苯肼为衍生剂，色谱柱为C18（150mm×4.6mm），流动相为乙腈-水-冰醋酸（50:50:0.05）,流速1.0ml/min，检测波长355nm，柱温40℃。结果实验表明甲醛浓度在0.10mg/L～52mg/L范围内与其衍生物峰的面积具有良好的线性关系(r=0.9998)，平均回收率为90.7%～101.5%。结论柱前衍生高效液相色谱法，能消除复杂机体的干扰，具有线性好，重复性好，精确度高，干扰少等优点，结果准确可靠。
【关键词】甲醛猪血制品高效液相色谱法
近年来食品安全问题频发，随着食用血旺中毒事件的发生，人们也开始对猪血制品进行关注，血豆腐等的制作黑幕也被曝光，原来在猪血中添加甲醛已成为行业的潜规则。甲醛是一种有毒物质,可凝固蛋白,若食品中甲醛浓度高，经消化道摄入时，会对胃肠道产生刺激，导致摄入者出现恶心、呕吐、腹痛等症状，大量摄入，严重者还可能危及生命[1,2]。甲醛被世界公认为毒性较高的物质，我国将其列在有毒化学品优先控制名单的第二位[3]。故食品添加剂使用卫生标准中规定严禁将甲醛及其化合物当食品添加剂使用[4,5]。但因为甲醛能有让猪血中的蛋白质快速变性的作用，也就是让猪血快速凝结，另外，加入甲醛还可以让血制食品的表面颜色美观，延长保存时间，所以很多不法商贩还是将其添加在食品中。
国以民为本，民以食为天，食以安为先，食品安全，关系到国计民生，责任重于泰山。目前食品中甲醛的测定方法有很多种，主要有分光光度法、滴定法、气相色谱法和液相色谱法等[6]。然而食品中测定甲醛含量的标准只针对水产品，猪血中甲醛含量的标准还没有被制定，故笔者通过建立高效液相色谱法测定猪血制品中的甲醛含量，旨在为食品监管部门打假提供科学依据，为人民饮食安全保驾护航。
1.仪器与试剂
SHIMADZULC-2010高效液相色谱仪（配紫外检测器），恒温水浴振荡器，电子天平（感量0.01g，0.1g），高速离心机，乙腈、甲醇均为色谱纯，2,4-二硝基苯肼、冰醋酸均为分析纯，实验用水为去离子水，甲醛标准溶液购自中国药品生物制品检定所，批号为111650-2010，浓度为10.4mg/ml。样品：市售血肠、血豆腐。
2.方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：DiamonsilC18（150mm×4.6mm,5μm,迪玛公司）；
流动相：乙腈-水-冰醋酸（50:50:0.05）；
流速：1.0ml/min；检测波长：355nm;
柱温：40℃；进样量：20μl。
2.2样品测定
2.2.1衍生液制备
称取0.2g的2,4-二硝基苯肼，用适量内含0.5%（体积分数）醋酸的乙腈溶解后置于100ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
2.2.2供试品溶液制备
取样品剪碎，称取10g，加水20ml溶解，振摇提取30分钟，置离心机上4000r/min离心5min，取上清液1ml和衍生化液2ml置10ml容量瓶中，加乙腈定容至刻度，混合均匀，置60℃水浴中静置反应30min。冷却后，用0.45um滤膜滤过，即得。
2.2.3测定方法
精密吸取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪中，通过比较标准组份与供试品在相同保留时间处出现的色谱峰，记录峰面积，从标准曲线上读出甲醛含量。
2.3线性关系
标准储备液制备:精密吸取甲醛标准溶液10ml于100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制得1.04mg/ml的标准储备液。根据需要用水稀释成所需要的标准工作液。
分别精密吸取0.1ml、5ml、10ml、25ml和50ml甲醛标准储备液于100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液1ml和衍生化液2ml置10ml具塞试管中，混合均匀后在60℃水浴中静置反应30分钟。冷却后，用0.45um滤膜滤过，取20μl注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定。以甲醛浓度x为横坐标,以衍生产物2,4-二硝基苯腙的峰面积y为纵坐标,绘制标准曲线,其线性回归方程为:y=258912x+1523(r=0.9998)。结果表明:甲醛浓度在0.10μg/ml～52μg/ml范围内与其衍生物峰面积具有良好的线性关系。
2.4精密度试验
取同一浓度甲醛标准工作液溶液，连续进样6次，每次20μL，记录色谱峰面积，甲醛衍生物峰面积的相对标准差（RSD）为1.0%，结果表明精密度良好。
2.5重复性试验
取同一样品6份，按样品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定，甲醛平均含量为49.5mg/kg，RSD为0.4％。
2.6加标回收率
分别称取已知甲醛浓度的血肠和血豆腐，分别添加三个不同浓度的甲醛标准溶液进行回收实验，平行测定6次，回收率范围为，RSD在之间，说明方法的准确度和精密度均达到残留分析要求。
2.7稳定性试验
取样品测定项下的供试品溶液在0，4，8，16，24，48h后分别进样测试，记录色谱图，按峰面积计算，RSD为0.64%，结果表明在48小时内稳定性良好。
3.讨论
3.1经方法学验证，本方法检测灵敏高、重复性好，精密度高、结果准确可靠，可用于猪血制品中甲醛残留量的质量控制，已经获得辽阳市科技进步三等奖。
3.2本方法改进了前处理方法，由于食品中甲醛的前处理方法大都是蒸馏法，这种方法重现性差，提取时间长，于是我们采用衍生液、60℃水浴振摇法提取能提取样品中游离甲醛和可逆结合态甲醛,同时能避免样品中内源性甲醛的形成,与现有检测方法比较,衍生液提取法快速、简便、重现性好,是测定食品中甲醛较合理的前处理方法。
参考文献
[1]吕春华，陈梅，陈笑梅，等.衍生液提取-高效液相色谱法测定食品中甲醛[J].理化检验-化学分册，2011,47(9):1005-1008.
[2]谭莹，倪竹南，张晶，等.HPLC法检测食品中的甲醛[J].中国卫生检验杂志，2011,21(4):851-853.
[3]韩宏伟.食品中甲醛的检测方法[J].国外医学卫生分册，2008,35(5):318-321.
[4]刘辉，吴波，孙哲，等.水发食品动物血使用甲醛情况调查[J].医药论坛杂志，2004,25(3):2.
[5]李东方，贾薇，张秀丽，等.高效液相色谱法测定水中甲醛、乙醛、丙烯醛[J].中国公共卫生，2003,19(12):1511-1512.
[6]洪家敏.甲醛污染的危害及检测方法研究进展综述[J].安徽预防医学杂志，2007,13(13)：44-47.