益气补肾活血法防治家兔膝骨性关节炎的实验研究

论文摘要

目的:观察益气补肾行血方(北芪、牛膝、石斛、芍药、狗脊、红花、骨碎补、青风藤)对家兔膝骨性关节炎模型的治疗作用及其可能的作用机制。 方法:将60只新西兰大耳兔随机分成四组,A组9只,B～D组各17只,采用左后肢过伸位石膏管型固定法复制骨关节炎(Osteoarthritis,OA)动物模型。造模一周后,A、B组用生理盐水8ml/天灌胃,C组用壮骨关节丸1.2g/天灌胃,D组用益气补肾行血方15.6g/天灌胃。分别于灌胃后第7周和第13周,各组随机挑选一半处死,各组关节进行大体观察和手术显微镜下观察,参照关节镜下标准进行分级,取股骨髁负重区软骨进行组织病理学观察并做各组C.Colombo评分比较;用免疫组织化学方法检测各组软骨细胞增殖情况,同时用末端原位标记法检测各组软骨细胞凋亡情况。 结果:灌胃后第7周和第13周,B～D组大体及镜下观察均有不同程度的OA软骨退变,A组正常。在手术显微镜下A～D组关节软骨表面分级比较有统计学意义(第7周,P=0.001;第13周,P=0.000)。D组和C组病理总积分均明显低于B组(P<0.01),D组低于C组(第7周,P=0.004;第13周,P=0.002)。灌胃后第7周,在增殖阳性细胞指数上,C、D组高于B组(P<0.01),D组高于C组(P=0.000);在凋亡阳性细胞指数上,C、D组低于B组(P<0.01),C组与D组无明显差异(P=0.567)。灌胃后第13周,在增殖阳性细胞指数上,B、C、D各组之间均无统计学差异(P>0.05);在凋亡阳性细胞指数上,C、D组低于B组(P<0.01),D组低于C组(P=0.025)。 结论:过伸位石膏管型固定法可以复制出OA动物模型。益气补肾行血方可以明显改善实验家兔骨关节炎病理积分,并能有效抑制关节软骨细胞过度凋亡和促进软骨细胞的增殖。推测益气补肾活血法的作用机制,在OA的初中期,通过促进软骨细胞增殖和抑制其凋亡同时起作用;但在OA的中晚期,主要是通过抑制其过度凋亡起作用。所有结果提示,益气补肾行血方对OA有一定的防治效果,值得进一步研究和开发。

论文目录

• 中文摘要
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• 英文缩略词
• 正文
• 1 前言
• 1.1 OA的组织病理学特点
• 1.2 西医学对OA发病机制的认识
• 1.3 OA的西医治疗方法概况
• 1.4 OA动物模型的研究概况
• 1.5 中医学对OA病因病机的认识
• 1.6 OA的中医内治法概况
• 1.7 各种中医内治法对OA软骨组织病理的影响研究现状
• 1.8 益气补肾行血方方义
• 1.9 本实验的研究目的及内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 技术路线图
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 分组
• 2.3.2 造模
• 2.3.3 给药方法
• 2.3.4 取材
• 2.3.5 观察指标
• 2.3.6 统计处理
• 3 结果
• 3.1 大体观察
• 3.1.1 大体情况观察
• 3.1.2 大体解剖观察
• 3.2 各组关节软骨表面分级情况
• 3.3 关节软骨组织HE染色、Safranin’O／Fast Green染色光镜观察
• 3.4 关节软骨标本C.Colombo总评分及软骨细胞病理评分结果统计
• 3.5 各组关节软骨细胞增殖的免疫组化结果
• 3.6 TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况
• 4 讨论
• 4.1 确立益气补肾活血法作为OA内治法的理论依据
• 4.2 过伸位石膏管型固定法复制OA动物模型方法的评价
• 4.3 益气补肾活血法对骨关节炎组织病理学的影响分析
• 4.4 益气补肾活血法对OA关节软骨细胞增殖和凋亡的影响分析
• 4.5 益气补肾行血方其它方面的作用分析
• 5 结论及展望
• 6 参考文献
• 7 发表论文
• 8 附图
• 9 致谢