首页> 正文

Hv对SCA3/MJD细胞模型和转基因果蝇模型的保护作用研究

2020-12-07阅读(468)

Hv对SCA3/MJD细胞模型和转基因果蝇模型的保护作用研究

论文摘要

背景：遗传性脊髓小脑型共济失调（hereditary spinocerebellar ataxia, SCAs）是一类常见的神经系统遗传病,根据neuromuscualr website （http://neuromuscular.wustl.edu/ataxia/domatax.html）截止到2009年11月5日发布的信息,迄今至少已定位了30种基因型,其中18个疾病基因已被克隆。脊髓小脑型共济失调3型（spinocerebellar ataxia type 3/Machado-Joseph disease,SCA3/MJD）为最常见的SCAs亚型,在中国人群中几乎占常染色体显性遗传脊髓小脑型共济失调的60%,其致病基因-MJD1基因编码区的3’端含有一段CAG三核苷酸重复序列,正常人重复次数约12-40次,而SCA3/MJD患者可达52-86次,且CAG异常重复次数越多,发病年龄越早,症状越严重。迄今为止已发现九种神经退行性疾病是由于致病基因开放阅读框（open reading frame, ORF）中CAG三核苷酸重复扩展突变所致,包括SCA1、SCA2、SCA3/MJD、SCA6、SCA7、SCA17,以及亨廷顿舞蹈病（huntington disease,HD）、脊髓延髓肌萎缩症（spinal and bulbar muscular atrophy, SBMA）、齿状核红核苍白球路易体萎缩症（dentatorubral-pallidoluysian atrophy, DRPLA）。该类疾病统称为多聚谷氨酰胺（polyglutamine, polyQ）疾病。目前有关polyQ疾病的发病机制尚未完全阐明,临床上亦缺乏有效的治疗。组蛋白乙酰化是一种翻译后修饰,能导致染色质结构及转录调控的改变。目前认为组蛋白乙酰化与去乙酰化水平在组蛋白乙酰转移酶（histone acetyltransferase,HAT）和组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）的作用下保持着动态平衡,从而维持基因正常的转录调控功能。有研究表明组蛋白乙酰化水平降低可能是引起细胞毒性作用、促发polyQ疾病转录异常的关键步骤。国内外不少学者已经在体外证实组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitors, HDACIs）能够抑制polyQ蛋白的毒性作用,缓解HD、SBMA、DRPLA等的病情,延缓疾病进展。然而对于同样属于polyQ病的SCA3/MJD疾病,至今国内外尚未见有关运用HDACIs进行治疗的相关研究报道。Hv（因涉及到保密性问题,本实验研究中所运用的组蛋白去乙酰化酶抑制剂统一用“Hv”表示）属于HDACIs中的短链脂肪酸类,其半衰期长,毒副作用小,已在临床上用于治疗其他疾病多年。Hv除了通过抑制组蛋白去乙酰化而调节基因转录外,还可通过多条途径,如通过诱导热休克蛋白（heat shock protein, HSP）的表达来保护神经元等。而在前期工作中,本课题组成员已证实HSP22对SCA3/MJD转基因果蝇模型具有保护作用,因此我们选用HDACIs中的Hv来进行SCA3/MJD的治疗研究。目的：探讨Hv对SCA3/MJD细胞模型及转基因果蝇模型的保护作用及其机制,为临床上运用HDACIs治疗SCA3/MJD疾病提供科学的理论依据。方法：1.应用荧光显微镜技术了解Hv对SCA3/MJD细胞模型中异常蛋白聚集体的影响。2.运用Western-blot技术检测Hv对野生型、含polyQ扩展突变型ataxin-3蛋白及乙酰化组蛋白H3和H4表达水平的影响。3.应用PI/Annexin-V-FITC双染流式细胞仪技术分析Hv对SCA3/MJD细胞模型凋亡率的影响。4.利用GAL4/UAS系统构建在眼睛及神经系统表达致病蛋白的SCA3/MJD转基因果蝇模型。5.利用光学显微镜和扫描电镜观察Hv对SCA3/MJD转基因果蝇模型复眼的影响。6.通过表型观察,了解Hv对SCA3/MJD转基因果蝇模型爬行能力及寿命的影响。结果：1.野生型ataxin-3蛋白在细胞中呈弥散分布,而polyQ扩展突变型ataxin-3蛋白能在细胞中形成异常蛋白聚集体；不同剂量Hv干预后,polyQ扩展突变型SCA3/MJD细胞模型中异常蛋白聚集体阳性细胞率及polyQ扩展突变型ataxin-3蛋白的表达水平较其未给Hv干预对照组相比无明显变化。2.PI/Annexin V-FITC双染流式细胞仪结果显示：未予以Hv干预的空载体pEGFP-N1转染组及野生型pEGFP-N1-ataxin-3-20Q转染组细胞早期凋亡率无明显差异,而pEGFP-N1-ataxin-3-68Q转染组细胞的早期凋亡率明显高于空载体组及野生型组细胞；不同剂量的Hv干预polyQ扩展突变型SCA3/MJD细胞模型后,其早期细胞凋亡率明显下降,且剂量越大凋亡率下降越明显。3.Western-blot检测发现：未予以Hv干预的空载体pEGFP-N1转染组及野生型pEGFP-N1-ataxin-3-20Q转染组细胞中乙酰化组蛋白H3、H4表达水平无明显差别,而polyQ扩展突变型SCA3/MJD细胞模型中乙酰化组蛋白H3、H4表达水平低于空载体组和野生型组。不同剂量Hv干预后,随着Hv剂量的增加,polyQ扩展突变型SCA3/MJD细胞模型的乙酰化组蛋白H3、H4表达水平逐渐升高。4.利用GAL4/UAS系统分别构建了在果蝇眼睛和神经系统中以不同水平表达MJDtr-Q78蛋白的SCA3/MJD转基因果蝇模型。该模型表现为进行性的复眼结果破坏、色素脱失,爬行能力下降及寿命缩短,且其严重程度与MJDtr-Q78蛋白的表达量及表达部位有关。5.Hv干预SCA3/MJD转基因果蝇模型后,其复眼结构破坏及色素脱失好转,且Hv剂量越大,复眼改善越明显。6.Hv干预SCA3/MJD转基因果蝇模型后,其爬行能力得到一定程度的改善,且Hv剂量为1.0mM到1.5mM时爬行能力改善最明显。7.一定剂量的Hv （0.5mM）能延长SCA3/MJD转基因果蝇模型的寿命,而当Hv剂量过大时反而会缩短SCA3/MJD转基因果蝇模型及野生型果蝇的寿命。结论：1.进一步证实polyQ扩展突变能导致细胞内异常蛋白聚集体的形成,发现Hv不能减少SCA3/MJD细胞模型中异常蛋白聚集体的形成和ataxin-3蛋白的表达。2.进一步证实polyQ扩展突变能诱导细胞凋亡,发现Hv可抑制polyQ扩展突变型ataxin-3蛋白的细胞毒性作用,从而降低SCA3/MJD细胞的早期凋亡率。3.发现SCA3/MJD细胞模型中存在组蛋白H3、H4乙酰化水平的降低,而Hv可提高SCA3/MJD细胞模型的组蛋白H3、H4乙酰化水平。4.成功地构建了在果蝇眼睛和神经系统中以不同水平表达MJDtr-Q78蛋白的SCA3/MJD转基因果蝇模型,进一步证实扩展突变型polyQ蛋白的表达量及表达部位与SCA3/MJD转基因果蝇模型的表型及严重程度存在相关性。5.发现一定剂量的Hv能减轻SCA3/MJD转基因果蝇模型的复眼结构破坏与色素脱失,并能改善SCA3/MJD转基因果蝇模型的爬行能力和延长其寿命。即一定剂量的Hv在一定程度上具有保护SCA3/MJD转基因果蝇模型的作用。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 英文缩略词
  • 前言
  • 第一部分 Hv对SCA3/MJD细胞模型的作用研究
  • 第一章 Hv对polyQ扩展突变型SCA3/MJD细胞模型中蛋白聚集体的形成及ataxin-3蛋白表达水平的影响
  • 1、仪器与试剂
  • 2、实验方法
  • 3、结果
  • 4、分析与讨论
  • 第二章 Hv对polyQ扩展突变型SCA3/MJD细胞模型凋亡率的影响
  • 1、仪器与试剂
  • 2、实验方法
  • 3、结果
  • 4、分析及讨论
  • 第三章 Hv对polyQ扩展突变型SCA3/MJD细胞模型中组蛋白H3、H4乙酰化水平影响
  • 1、仪器与试剂
  • 2、实验方法
  • 3、结果
  • 4、分析与讨论
  • 第二部分 Hv对SCA3/MJD转基因果蝇模型的作用研究
  • 第一章 SCA3/MJD转基因果蝇模型的构建及鉴定
  • 1、仪器与试剂
  • 2、实验方法
  • 3、结果
  • 4、分析与讨论
  • 第二章 Hv对SCA3/MJD转基因果蝇模型复眼的影响
  • 1、仪器与试剂
  • 2、实验方法
  • 3、结果
  • 4、分析与讨论
  • 第三章 Hv对SCA3/MJD转基因果蝇模型爬行能力的影响
  • 1、仪器与试剂
  • 2、实验方法
  • 3、结果
  • 4、分析与讨论
  • 第四章 Hv对SCA3/MJD转基因果蝇模型寿命的影响
  • 1、仪器与试剂
  • 2、实验方法
  • 3、结果
  • 4、分析与讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 综述
  • 运用组蛋白去乙酰化酶抑制剂治疗多聚谷氨酰胺疾病的研究进展
  • 致谢
  • 攻读学位期间主要的研究成果

    • 相关论文文献

    • [1].HV液压油低温性能研究[J]. 润滑油 2016(06)
    • [2].HV间期在判断房室传导阻滞预后和治疗中的临床意义[J]. 南通大学学报(医学版) 2019(06)
    • [3].基于HV分割的快速分形图像编码算法[J]. 软件导刊 2017(11)
    • [4].丰田凯美瑞HV混合动力系统故障分析[J]. 汽车维修技师 2017(05)
    • [5].如何慧眼识“滤筒”——之美国HV滤材篇[J]. 气体分离 2013(01)
    • [6].阵发性室上性心动过速伴短HV间期导管消融一例[J]. 中国心脏起搏与心电生理杂志 2018(02)
    • [7].HV离合器轴承损坏原因分析及故障排除[J]. 设备管理与维修 2015(S2)
    • [8].铝合金地铁牵引梁HV形坡口焊缝MIG焊工艺分析[J]. 金属加工(热加工) 2020(11)
    • [9].HV凯美瑞起动后熄火[J]. 汽车电器 2018(01)
    • [10].HV单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1A8 ScFv/Cκ/P的构建和表达[J]. 第四军医大学学报 2008(11)
    • [11].双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析[J]. 吉林大学学报(理学版) 2014(01)
    • [12].以色列“梅卡瓦”Mk4主战坦克安装了“战利品”-HV主动防护系统[J]. 国外坦克 2017(01)
    • [13].2004款普锐斯车HV蓄电池频繁充放电[J]. 汽车维护与修理 2019(05)
    • [14].CRH380BK动车组变压器HV插头放电故障的研究与解决[J]. 铁路采购与物流 2015(03)
    • [15].改进型HV高强度凝胶堵水体系的应用[J]. 岩性油气藏 2018(05)
    • [16].PR方程结合HV混合规则计算HFC/HFC和HFC/HC二元混合物气液相平衡[J]. 热科学与技术 2012(03)
    • [17].大剂量重组人生长激素对小于胎龄儿矮小症患者IGF-1、IGFBP-3、HV的影响[J]. 中国卫生标准管理 2017(25)
    • [18].广丰凯美瑞、雷凌HV故障两例[J]. 汽车维修技师 2018(01)
    • [19].丰田紧凑型HV动力控制单元介绍(上)[J]. 汽车维修与保养 2019(08)
    • [20].三菱扶桑首度在海外投产小型HV卡车[J]. 专用汽车 2012(10)
    • [21].基于HV分割的分形图像检索算法[J]. 硅谷 2011(08)

    标签：;  ;  ;  ;  

    Hv对SCA3/MJD细胞模型和转基因果蝇模型的保护作用研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5