山羊松果体微囊化细胞异体移植的初步研究

论文摘要

为研究异体移植的微囊化松果体细胞对山羊生殖系统的影响,本试验首先将山羊分为两组,即试验组和对照组,每组三只,按照常规的饲养方法进行饲养管理；用高效液相色谱法检测培养基中褪黑素含量的方法对松果体细胞的鉴定；采用氯化钡作为交联剂与纯化的海藻酸钠按照一步成囊的方法制备微囊,将体外培养的山羊松果体细胞用微囊包裹,并异体移植到试验组山羊的背部皮下,然后缝合,消毒；在试验的不同阶段采取山羊的血样,注入到抗凝管中离心获得血浆,对离心出来的血浆进行萃取处理,同时建立相应的色谱条件,再用高效液相色谱法检测血浆中褪黑素的含量,用电化学发光免疫法直接检测血浆中雌二醇、促卵泡生成素和促黄体生成素的含量,并与相应对照组的含量结果比较。结果是在移植第1d,与对照组相比,褪黑素、雌激素和促卵泡生成素的含量差异不显著(P>0.05)；在移植第4d,与对照组相比,褪黑素、雌二醇和促卵泡生成素的含量差异极显著(P<0.01)；在移植第7d,与对照组相比,褪黑素的含量差异显著(P<0.05),雌二醇的含量差异极显著(P<0.01),促卵泡生成素的含量差异不显著(P>0.05)；在整个试验过程中,促黄体生成素的含量极低。试验结果表明异体移植的微囊化松果体细胞在山羊体内的一段时间内代谢正常,并且松果体细胞的分泌功能旺盛,提高了山羊血液中的褪黑素含量,同时受到褪黑素含量变化的影响,生殖激素即雌二醇和促卵泡生成素的含量也有一定的波动,但在试验的最后,微囊化松果体细胞最终因为炎性细胞的浸润导致微囊的纤维化使得囊内的细胞缺乏生存所需要的营养物质而死亡,使异体移植试验维持时间短。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表（Abbreviation）
• 1 前言
• 1.1 研究问题的由来
• 1.2 文献综述
• 1.2.1 微囊化细胞移植的研究背景
• 1.2.2 微囊的异体移植
• 1.2.2.1 微囊的免疫隔离作用
• 1.2.2.2 形成细胞微囊的材料
• 1.2.2.3 海藻酸盐
• 1.2.2.4 细胞微囊的制作工艺
• 1.2.3 微囊移植技术
• 1.2.3.1 微囊移植的条件
• 1.2.3.2 微囊移植技术的特点
• 1.2.3.3 微囊移植的部位
• 1.2.3.4 微囊包裹的细胞浓度
• 1.2.3.5 微囊化细胞的种属差异
• 1.2.4 已成功地用于细胞微囊的材料
• 1.2.5 微囊化人工细胞在动物医学和畜牧生产中的应用前景
• 1.2.6 松果体与MT的概况
• 1.2.6.1 松果体
• 1.2.6.2 MT的代谢和生理功能
• 1.2.7 MT和生殖激素的关系
• 1.2.7.1 中枢神经系统对下丘脑分泌的调节
• 1.2.7.2 系统内部由上而下的调控
• 1.2.7.3 系统内部由下而上的反馈调节
• 1.2.8 山羊的繁殖
• 1.3 研究目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 松果体细胞的体外培养
• 2.2.2 松果体细胞的鉴定
• 2.2.3 MTT法检测细胞增殖
• 2.2.4 细胞微囊的制作方法
• 2.2.5 HPLC检测血浆中MT的方法建立
• 2.2.5.1 色谱条件
• 2.2.5.2 血样的处理方法
• 2.2.5.3 血浆中MT标准曲线的建立
• 2.2.5.4 回收率的测定
• 2.2.5.5 该方法精密度的测定
• 2.2.6 ECLI检测血浆中生殖激素的方法
• 2.2.6.1 ECLI检测的原理
• 2.2.6.2 生殖激素的检测
• 2.2.7 微囊化细胞的异体移植
• 2.2.8 统计与分析
• 3 试验结果
• 3.1 移植前的试验结果
• 3.1.1 松果体细胞的形态观察
• 3.1.2 用HPLC检测培养基中的MT
• 3.1.3 MTT法测定山羊松果体细胞的增殖
• 3.1.4 制成微囊的图片
• 3.1.5 液相检测MT标准品的色谱图
• 3.1.6 血浆中MT的标准曲线
• 3.1.7 回收率的测定结果
• 3.1.8 方法精密度的测定结果
• 3.1.9 移植前的山羊松果体细胞的包裹图片
• 3.2 移植后的试验结果
• 3.2.1 试验结束的微囊化细胞回收的图片
• 3.2.2 HPLC检测MT的结果
• 2,FSH,LH的结果'>3.2.3 ECLI检测血浆中E₂,FSH,LH的结果
• 4 讨论与小结
• 参考文献
• 致谢