猪Ⅱ型圆环病毒全基因克隆及结构基因表达研究

论文摘要

本研究通过设计猪Ⅱ型圆环病毒（PCV2）特异性引物,采用PCR方法对长春地区某猪场的疑似PMWS致死猪进行检测,结果为PCV2阳性。进一步将肺、脾脏、淋巴结等组织病料用PK-15细胞进行病毒分离,并用透射电镜和间接免疫荧光实验鉴定分离的毒株,证明为猪Ⅱ型圆环病毒。利用PCR分段扩增序列方法,并测定了该PCV2长春地区分离株的全基因组序列,比较了该株病毒与Gene Bank中其他分离株序列间的同源性和遗传进化关系,该毒株与欧洲毒株同源性最高。将该分离毒株的部分结构基因截短,利用大肠杆菌表达系统,对PCV2结构基因进行了表达,证明了表达蛋白主要以包涵体形式存在。进一步应用尿素梯度洗涤法对包涵体进行纯化及复性。利用纯化复性的重组PCV2结构蛋白免疫家兔,制备了抗PCV2抗体。ELISA检测表明,制备的抗PCV2血清具有较高的抗体效价。为今后对PCV2的进一步研究奠定了坚实基础。

论文目录

• 提要
• 第一章 绪论
• 1 文献综述
• 1.1 猪圆环病毒分子生物学研究进展
• 1.1.1 病毒的分类地位
• 1.1.2 病毒的生物学特性
• 1.1.3 病毒的基因组结构
• 1.1.4 病毒的复制与转录
• 1.1.5 病毒基因组编码蛋白
• 1.2 猪圆环病毒临床症状和病理学变化
• 1.3 猪圆环病毒致病机理
• 1.4 猪圆环病毒检测方法及防制
• 第二篇 研究内容
• 第一章 猪Ⅱ型圆环病毒长春地区分离株的鉴定、全基因克隆及序列分析
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 猪Ⅱ型圆环病毒衣壳蛋白表达载体的构建及原核表达
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 重组蛋白的复性、初步纯化及应用重组蛋白制备抗猪Ⅱ型圆环病毒血清
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
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