乙肝母婴阻断母子血清HBV DNA检测与序列分析

论文摘要

目的:分析血清标本检测中HBsAg阴性,HBV DNA阳性结果的可能原因,完善乙肝母婴阻断措施评价检测指标;描述氨基酸位点置换在母婴阻断成功和失败儿童及母亲中的分布,探讨S区、C区氨基酸置换与母婴阻断效果的关系,推测可能与母婴阻断失败相关的HBV氨基酸变异的位点。方法:本次研究血清来自北京、兰州、宁波三地进行乙肝母婴阻断研究所收集的血清标本,采用酶联免疫吸附法检测乙肝病毒感染的血清学指标。血清HBsAg阳性,抗-HBs阴性儿童定义为母婴阻断失败儿童,其母亲为母婴阻断失败母亲。经QIAamp DNA Blood Mini Kit提取HBV DNA,采用巢式PCR法扩增HBV DNA S区基因片段,半巢式PCR法扩增HBV DNA C区基因片段,分别纯化测序。利用生物信息软件DNA STAR将核苷酸序列与HBVA-H各基因型标准序列比对分析,进行基因分型。利用软件将核苷酸序列推导出氨基酸序列,进行氨基酸位点变异分析。应用SAS9.0整理实验结果,并将符合分析要求的S区、C区序列数据,以每个氨基酸位点为变量,结合HBV的分子生物学特点进行分析。结果:1、母婴阻断成功母亲血清标本273份,母婴阻断失败母亲血清标本72份,两组HBV DNA阳性数分别为123份、60份,HBV DNA检出率分别为45.05%、83.33%;母婴阻断成功儿童血清标本149份,母婴阻断失败儿童血清标本79份,HBV DNA阳性数分别为18份、69份,HBV DNA检出率分别为12.08%、87.34%。2、HBV DNA检测阳性标本中221份测序得到S基因片段。HBV DNA检测阳性儿童均列为母婴阻断失败儿童,共72份,基因型分别为A型、B型、C型、D型。母婴阻断成功母亲87例,母婴阻断失败母亲62例,两组基因型均为B型、C型、D型构成;在兰州地区B型和C型母亲母婴阻断成功率比较,差异无统计学意义,P=0.8682,。3、共得到179份S基因片段氨基酸序列,其中儿童序列63份,母婴阻断成功14份,母婴阻断失败49份;母亲序列116份,母婴阻断成功69份,母婴阻断失败47份。138份C基因片段氨基酸序列可进行氨基酸位点分析,其中儿童序列42份,母婴阻断成功10份,母婴阻断失败32份;母亲序列96份,母婴阻断成功62份,母婴阻断失败34份。在S区氨基酸位点分析结果显示,母婴阻断儿童中有60.3%（38/63）序列发生氨基酸位点置换,母婴阻断成功母亲和失败母亲分别为72.5%（50/69）、74.5%（35/47）,三者差异无统计学意义。4、在母婴阻断成功与失败儿童中,单个氨基酸位点置换率比较有差异的氨基酸位点（OR值95%可信区间不包括1的位点）有,preS区第27、38、65、87、88、114位氨基酸位点,S区第46、122、133、159位氨基酸位点,C区第15、30、33、86、109位氨基酸位点;在母婴阻断成功与失败母亲中,单个氨基酸位点置换比较,在母婴阻断成功组和失败组中有差异的氨基酸位点有,preS区第35、39、45、48、51、54、57、115、121、138、148、152、154位氨基酸位点,S区第5、8、24、56、57、59、64、85、143、161位氨基酸位点。C区第61、80位氨基酸位点。其中某些位点在阻断成功或失败对象中有置换率为0的项。结论:结合血清中HBV DNA检测指标共同评价母婴阻断措施效果;母婴传播与母亲体内HBV载量成正相关;B型和C型HBV的母亲,母婴阻断成功率无差别,还不能得出基因型与母婴传播及其阻断效果的关系;在母婴阻断成功儿童（HBsAg阴性）和阻断失败儿童（HBsAg阳性）中氨基酸位点置换率无明显差别,母亲体内HBV DNA preS和S区氨基酸位点置换可能与母婴阻断效果有关。

论文目录

• 主要英文缩写词
• 摘要
• 英文摘要
• 第一部分
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分
• 方法原理
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述
• 附件1
• 附件2
• 附件3
• 致谢