农杆菌Ri诱导丹参毛状根培养体系的优化及有效成份累积规律的研究

论文摘要

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为我国传统中药,很早就载于《神农本草经》,具有祛癖止痛,活血通经,凉血消痛,清心除烦之功,常用于心血管系统和血液系统等疾病的治疗。丹参主要含有脂溶性的二萜醌类化合物(丹参酮类成分)和水溶性的酚酸类化合物,均具有较强的药理活性。本研究主要对农杆菌Ri诱导丹参毛状根培养体系进行优化,并对丹参毛状根中丹参酮的累积规律进行相应的研究。取得如下结论:(1)发根农杆菌R1601菌株侵染丹参外植体,不同外植体其诱导率有很大的差别,其中叶片的诱导率最高,达45 %,其次为茎段9.7 %,叶柄未诱导出毛状根。而由发根农杆菌感染带节茎段转化的丹参幼苗,诱导率为100 %,其根系庞大,呈须根状,节间明显缩短。(2)在测定丹参毛状根中几种药用有效成份的研究表明,培养至第56 d,毛状根增长约15倍。不同培养时期丹参毛状根的增长倍数与培养时间成正相关,分别于培养时间的第28 d、42 d、56 d都有明显的增长。(3)丹参毛状根中几种药用成份在不同的的培养时期并未表现出如前人所报道的累积规律。另外,所培养的丹参毛状根并未检测出丹参酮Ⅰ的指纹图谱或丹参酮Ⅰ的含量过低。二氢丹参酮Ⅰ的含量则明显高于丹参酮ⅡA和丹参酮Ⅰ,而在前人对栽培丹参中药用成份的研究表明,丹参酮Ⅰ的含量高于二氢丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 丹参的研究概况
• 1.1.1 丹参的生物学特性
• 1.1.2 丹参的主要化学成分
• 1.1.3 我国药用植物的栽培现状和发展前景
• 1.1.4 丹参的组织培养及植株再生
• 1.2 利用毛状根培养技术进行次生代谢产物生产的研究
• 1.2.1 发根农杆菌
• 1.2.2 诱导毛状根生产植物次生代谢产物
• 1.3 发根农杆菌遗传转化的研究进展
• 1.4 影响毛状根生长的主要因素
• 1.4.1 培养基种类的影响
• 1.4.2 常量元素的影响
• 1.4.3 碳源的影响
• 1.4.4 光照的影响
• 1.4.5 pH 值的影响
• 1.4.6 激素的影响
• 1.4.7 诱导子的影响
• 1.5 生物反应器在植物次生代谢生产上的应用
• 1.5.1 利用生物反应器大规模培养药用植物毛状根的特点
• 1.5.2 生物反应器技术在植物组织培养中的应用
• 1.5.3 不同类型的生物反应器与毛状根的培养
• 1.6 本研究的目的及意义
• 第二章 丹参毛状根培养体系的建立及农杆菌转化植株的形态变化
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 丹参无菌苗的培养
• 2.1.3 发根农杆菌的培养与活化
• 2.1.4 毛状根的诱导
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 低温预处理对丹参陈种子萌发的影响
• 2.2.2 发根农杆菌对丹参不同来源外植体毛状根诱导差异比较研究
• 2.2.3 发根农杆菌R1601 菌株诱导丹参毛状根及丹参转化根的形态变化
• 2.2.4 丹参毛状根的鉴定
• 2.2.5 羧苄青霉素二钠的除菌效果
• 2.3 讨论
• 第三章 丹参毛状根有效成分丹参酮的累积规律
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料及样品制备
• 3.1.2 对照品的制备
• 3.1.3 仪器与试剂
• 3.1.4 色谱条件
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 不同培养时期丹参毛状根生长量分析
• 3.2.2 不同培养时期丹参毛状根丹参酮含量的分析
• 3.3 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介