HBV-DNA快速筛选平台的建立及中药益气活血方的干预作用研究

论文摘要

研究目的 （1） 采用LAMP方法和PCR方法检测HBV-DNA,并对LAMP方法的反应条件进行优化。比较两种方法检测病毒的灵敏性及特异性。（2）在2.2.15细胞平台上评价中药益气活血方的抗HBV作用,并以LAMP方法检测其HBV-DNA以初步观察益气活血方对HBV-DNA的抑制作用。 实验方法 （1） 采集医院确诊的乙肝患者的血清,提取血清中的HBV-DNA,以此为模板,采用LAMP方法进行扩增,在此基础上对LAMP方法的各种条件进行优化。 （2） 分别采用聚合酶链式反应（PCR方法）,环状介导的等温扩增（LAMP）两种方法对相同的标本进行HBVDNA的检测,对两种方法进行比较。 （3） 分别取用HBV阳性血清、DHBV阳性血清、正常HBV阴性血清在相同条件下进行实验,观察两种方法在检测中是否会出现假阳性结果,以确定LAMP方法的特异性。 （4） 选用具有益气活血养阴,清热解毒药方,在2.2.15细胞系的实验平台观察该方水提物对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用,根据所得的治疗指数（TI）来评价中药益气活血方体外抗乙肝病毒的效果。 （5） 将中药益气活血方作用于2.2.15细胞系的实验平台,提取该细胞中的HBV-DNA,以此为模板,采用LAMP方法进行扩增,通过检测2.2.15细胞的HBV-DNA含量来评价中药益气活血方对HBV-DNA的抑制作用,并在此基础上建立HBV-DNA新的评价平台。 实验结果 （1） 采用LAMP方法成功的扩增了HBV-DNA,并对其反应条件进行了优化。 （2） 同时使用PCR,LAMP两种方法对65份血清标本进行检测,LAMP方法与PCR方法相比,检测病毒的灵敏性更高。在HBsAg,HBeAg,HBcAb三项血清标志物全为阳性的标本中,LAMP方法的检出率为100%,在HBsAg,HBeAb,HBcAb三项血清标志物为阳性的标本中,LAMP方法的检出率也达到了80%。在与目前常用的PCR方法对比实验中,PCR方法在待测血清标本被稀释到10-5时就难以进行准确的检测了,而LAMP的方法在标本稀释到10-7时仍然能够获得较好的扩增结果。 （3） LAMP方法扩增HBV阳性标本时,没有出现非特异性扩增,HBV阴性血清和DHBV（鸭乙型肝炎病毒）阳性血清的扩增也没有出现假阳性结果。 （4） 中药益气活血方的2.2.15细胞的治疗指数,在浓度为6.25mg/ml时,对HBsAg的为4.81,对HBeAg为3.64。 （5） LAMP方法检测出中药益气活血方使2.2.15细胞中的HBV—DNA的量降低。

论文目录

• 前言
• 第一部分 乙型肝炎病毒检测方法的文献与实验研究
• 第一章 文献研究
• 第一节 乙型肝炎病毒检测方法的研究进展
• 第二节 LAMP方法原理介绍
• 第二章 实验研究
• 第一节 建立快速检测HBV-DNA的 LAMP新方法
• 第二节 LAMP方法灵敏性的实验研究
• 第三节 LAMP方法敏感性的实验研究
• 第四节 讨论
• 第二部分 中药益气活血方抗乙肝病毒的文献与实验研究
• 第一章 文献研究
• 第一节 抗乙肝病毒治疗的研究概况
• 第二节 中医药治疗乙肝的研究进展
• 第二章 实验研究
• 第一节 中药益气活血方抗 HBsAg与 HBeAg的作用研究
• 第二节 LAMP方法评价中药益气活血方对 HBV-DNA的抑制作用
• 第三节 讨论
• 结论与展望
• 参考文献
• 附录
• 致谢