论文摘要
L-苯丙氨酸（L-phenylalanine, Phe）是人和动物的必需氨基酸之一,是目前全球普遍允许使用的甜味剂（Aspartame）的制造原料之一,并且其代谢与人类遗传疾病如苯丙酮尿症,黑尿症和白化病有关,因此Phe代谢研究始终是人们关注的热点。Phe生物合成的路径长,耗能大,产率低,因此生产成本高,价格昂贵,国内所需产品长期依赖进口,所以构建能用于直接发酵L-苯丙氨酸的高产菌株具有重大的实际意义,因此本论文的工作也将围绕获得苯丙氨酸高产菌的目的展开。aroG基因编码的3—脱氧—D—阿拉伯庚酮糖—7—磷酸合成酶（AroG）是苯丙氨酸代谢途径中的关键酶,催化限速步骤E4P和PEP反应生成DAHP,受苯丙氨酸反馈抑制。此前本实验室研究人员通过定点突变Escherichia coli （E.coli）K-12 aroG基因的方法获得了可以解除反馈抑制的优势突变株。本论文在此基础上,以E.coli aroG野生型基因,可以解除反馈抑制的突变基因,以及Salmonella typhimnrium （S. typhimnrium） aroG野生型基因为亲本,通过DNAsuffling的方法对AroG进行改组,得到大量的aroG突变基因库。通过使用苯丙氨酸类似物对氟苯丙氨酸（pFP）的筛选,我们获得了4株能够于10 mg／ml pFP平板生长的突变株（EC2、EC4、EC6和EC8）,而在同样条件下培养的野生型菌株不能生长,因此这4株菌是已初步解除苯丙氨酸的反馈抑制突变株。对这突变株的aroG基因进行测序和序列分析,结果表明突变体Ec2发生了4个碱基突变,Ec6发生了4个碱基突变,Ec4有6个碱基突变,Ec8有7个点突变。对应氨基酸也发生了变化。其中Ec2突变基因的T430G,T431C,T662C碱基突变为两个点突变aroG亲本改组产生,T222G为新引入的突变。EC6突变基因的T662C碱基突变与亲本点突变同,T287C,G703A,G989A为新引入的突变。EC4突变基因的C449T,T644G,G645C碱基突变为两个点突变aroG改组产生,A315G,C435T,G853A为新引入的突变。EC8突变基因的T430G,T431C碱基突变与亲本点突变同,T114C,C197T,A212G,A404G,A925G为新引入的突变。本研究通过DNA shuffling技术有效的对aroG基因进行改组,积累并引入有益突变,实现分子的定向进化,解除AroG的苯丙氨酸反馈抑制,为工业上选育苯丙氨酸高产突变株提供了新的思路和方法。
论文目录
相关论文文献
- [1].代谢工程改造酿酒酵母促进L-苯丙氨酸的合成[J]. 食品与发酵工业 2020(09)
- [2].L-组氨酸和L-色氨酸对L-苯丙氨酸溶解度及晶型转化的影响[J]. 化学工程 2020(08)
- [3].L-苯丙氨酸聚肽的酶催化合成[J]. 化学通报 2018(04)
- [4].高效液相色谱法同时测定香灰菌发酵液中L-苯丙氨酸和2-苯基乙醇[J]. 食品工业科技 2020(14)
- [5].低苯丙氨酸饮食疗法在儿童苯丙酮尿症治疗中的应用价值[J]. 中国药物经济学 2016(12)
- [6].N-甲基-L-苯丙氨酸甲酯的合成[J]. 山东化工 2016(04)
- [7].高效液相色谱法同时测定生物转化液中L-苯丙氨酸和反式肉桂酸[J]. 广东化工 2015(17)
- [8].L-苯丙氨酸生产与应用[J]. 发酵科技通讯 2011(01)
- [9].国内L-苯丙氨酸产业浅析[J]. 精细与专用化学品 2011(07)
- [10].L-苯丙氨酸甲酯消旋反应改进[J]. 云南化工 2008(06)
- [11].溶剂调控苯丙氨酸衍生物自组装结构的研究[J]. 江西化工 2017(01)
- [12].日粮添加亮氨酸和苯丙氨酸对荷斯坦公犊生长性能及血清代谢物的影响[J]. 中国农业科学 2017(21)
- [13].L-苯丙氨酸衍生物凝胶因子的合成研究[J]. 北京服装学院学报(自然科学版) 2015(03)
- [14].母亲知识影响苯丙酮尿症患儿血苯丙氨酸浓度[J]. 中国妇幼保健 2014(22)
- [15].酪氨酸转氨酶法制备L-高苯丙氨酸[J]. 沈阳药科大学学报 2013(05)
- [16].聚乙二醇/盐双水相萃取L-苯丙氨酸的研究[J]. 食品工业科技 2012(06)
- [17].L-苯丙氨酸与精左氨基物偶联反应的研究[J]. 西南大学学报(自然科学版) 2009(06)
- [18].L—苯丙氨酸的合成技术研究进展[J]. 食品工程 2009(03)
- [19].比色法测定β-苯丙氨酸含量的研究[J]. 安徽农业科学 2008(35)
- [20].L-苯丙氨酸结晶工艺研究[J]. 中国矿业大学学报 2008(03)
- [21].单水复合条件下苯丙氨酸分子手性转变机制的理论研究[J]. 内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版) 2017(06)
- [22].L-苯丙氨酸脲类化合物的合成工艺改进[J]. 合成化学 2014(06)
- [23].大肠杆菌产L-苯丙氨酸发酵调控及代谢通量分析[J]. 中国生物工程杂志 2015(03)
- [24].酮苯丙氨酸钙原料药有关物质的鉴定与含量测定[J]. 分析测试学报 2015(04)
- [25].手性色谱柱法测定L-苯丙氨酸的光学纯度[J]. 食品与药品 2012(09)
- [26].不对称转换拆分制备D-苯丙氨酸甲酯[J]. 上海师范大学学报(自然科学版) 2012(06)
- [27].苯丙氨酸对肾上腺素电子转移性能的影响[J]. 菏泽学院学报 2008(05)
- [28].对我国L-苯丙氨酸产业化发展的一些看法[J]. 精细与专用化学品 2008(18)
- [29].二苯丙氨酸短肽手性结构的可控组装[J]. 化学学报 2019(11)
- [30].苯丙氨酸的电化学储锂性能[J]. 硅酸盐通报 2018(02)
标签：苯丙氨酸反馈抑制论文; 突变论文;