结核分枝杆菌CFP-10/ESAT-6融合蛋白模拟抗原表位的筛选

论文摘要

结核病是由结核分枝杆菌（MTB）引起的传染性疾病,是严重危害人民健康的公共卫生问题。目前,结核病控制存在的主要问题之一是病人检出率低、治愈率低。加大对MTB的基础研究,寻找特异性强、敏感性高的诊断方法,提高结核病人的检出率,以及寻找新的治疗方法或者开发新的抗结核药物,是结核病研究中亟待解决的问题。本研究利用噬菌体展示随机肽库技术成功筛选出7个CE融合蛋白的模拟抗原表位,并获得了定位于ESAT-6第58-61位氨基酸序列的CE融合蛋白的1个线性细胞抗原表位,具体研究内容如下:1、以抗CE融合蛋白多克隆抗体为靶分子,对随机噬菌体7肽库进行筛选。2、采用间接ELISA方法,对20份活动性肺结核患者和10份有卡介苗接种史健康人的血清标本抗体进行检测。3、选取含有WDAT保守序列的阳性单噬菌体5、CE融合蛋白,分别对2种血清标本抗体进行间接ELISA检测。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 结核病的现状和特点
• 1.2 结核病实验室诊断研究进展
• 1.2.1 结核病细菌学诊断进展
• 1.2.2 结核病血清学诊断进展
• 1.2.3 结核病分子生物学诊断进展
• 1.3 噬菌体展示技术及其应用研究进展
• 1.3.1 噬菌体展示技术概念
• 1.3.2 噬菌体展示技术原理
• 1.3.3 噬菌体展示系统的分类
• 1.3.4 噬菌体展示技术的运用
• 2 试验材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 主要实验材料及试剂
• 2.1.2 主要试剂的配置方法
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 重组蛋白的纯化
• 2.2.2 重组蛋白的浓度和含量的测定
• 2.2.3 噬菌体肽库对CE 单克隆抗体筛选
• 2.2.4 统计学处理
• 3 试验结果与分析
• 3.1 重组蛋白的纯化
• 3.2 蛋白含量的确定
• 3.3 噬菌体的生物淘选
• 3.4 噬菌体DNA 的测序
• 3.5 噬菌体阳性克隆的鉴定
• 3.6 噬菌体阳性克隆活性的检测
• 3.7 血清标本抗体的检测
• 4 讨论
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 个人简历