论文摘要
目的：阿霉素（Adriamycin，ADR）是肿瘤化疗中常用药，因其抗肿瘤谱广，缓解率高在临床上广泛用于治疗多种恶性肿瘤。然而，阿霉素在治疗的同时也带来了许多急慢性副作用，影响了药物的疗效。其中，以引起心脏毒性的最为严重，这在一定程度上限制了ADR临床上长期应用。因此，研究开发保护心脏毒性的药物，即有利于更好发挥阿霉素抗肿瘤的药效的同时，也避免其毒副作用，从而达到保护心肌的作用。参附注射液组方源自参附汤，临床上观察到，在含有ADR的化疗方案中运用参附注射液（ShengFu injection，SF）可明显减少ADR心脏毒性。实验研究表明，参附注射液可对抗ADR对心肌的脂质过氧化作用，保护细胞膜（维持细胞膜的稳定性），实现其心肌保护作用。为进一步深化参附注射液保护毒性心肌疾病的作用机理；本实验从细胞分子水平研究参附注射液对抗阿霉素心脏毒性的保护机理。为临床化疗方案中运用SF提供坚实的实验基础。方法：急性分离单个心肌细胞，Fure-2荧光负载后，运用Tillvision钙离子荧光成像及分析系统，观察单个心肌细胞内游离钙离子水平变化；另外采用国际先进的膜片钳技术，研究心肌细胞膜上L型钙通道的动力学变化；实验共分为五个部分。实验一建立阿霉素诱导心脏毒性心肌损伤模型，观察参附注射液干预，阿霉素诱导的心肌组织损伤情况；实验二观察SF预干预单个心肌细胞内游离钙离子浓度变化：实验三观察SF对咖啡因诱导的内钙释放的影响；实验四观察SF预干预对单个心肌细胞膜上L型钙通道动力学的影响；实验五观察不同浓度SF对正常心肌细胞膜上L型钙通道的动力学影响。结果：1、通过阿霉素诱导心脏毒性的病理结果提示：阿霉素诱导造成心肌细胞排列紊乱，细胞间质大量充血，有炎性细胞浸润，可见细胞坏死区；SF预干预后，阿霉素诱导的心肌毒性可减轻，病理结果提示：心肌排列尚可，细胞间质未见明显充血，未见有细胞坏死区。2、用Tillvision荧光系统检测和分析单个心肌细胞内游离钙离子浓度，观察到阿霉素诱导组单个心肌细胞内游离钙离子浓度异常升高，显著高于正常组（P＜0.01）；SF组不同浓度干预后，与对照组相比钙离子浓度显著降低（P＜0.01）。但SF干预未见明显浓度依赖性。3、SF可以显著性抑制咖啡因诱导的内钙释放（P＜0.05）。4、与正常组相比阿霉素诱导组心肌细胞膜上L型钙通道的平均开放概率显著增加（P＜0.01），平均电流均显著性高于正常组（P＜0.01），SF预干预组除高剂量组外中低剂量组心肌细胞膜上L性钙通道平均开放概率、平均电流幅度显著性低于对照组（P＜0.01）；与正常组相比未见显著性差异；SF干预未见明显浓度依赖性。5、不同浓度的SF作用于正常的心肌细胞结果提示：SF（35％—45％）可显著性增加L型钙通道的平均开放概率（P＜0.01），对平均电流及开放时间未见显著性影响；结论：阿霉素诱导心脏毒性，其机制之一是由于胞内钙超载，导致一系列心肌细胞损伤；SF显著性降低胞内异常钙离子升高，其降低胞内异常升高钙离子浓度可能机制是一方面抑制肌浆网内钙释放；另一方面可能是通过保护和稳定细胞膜，减少新的的钙通道生成，从而减少心肌细胞膜上L型钙通道平均开放概率，降低钙电流幅度，减少外钙内流，即减少了钙诱导钙释放的钙离子，从而减少了胞内游离钙离子浓度。是否影响到胞内钙离子外排及其转运的机制有待于进一步研究。通过以上实验观察，提示SF对阿霉素诱导的心脏毒性具有一定的保护作用。