论文摘要
目的 人过氧化物酶体增殖体激活受体γ2（hPPARγ2）基因全长cDNA克隆及真核表达载体pcDNA3.1（+）/hPPARγ2的构建。 方法 匀浆中国汉族人大网膜脂肪挚、提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增出hPPARγ2 cDNA基因全长。RT-PCR产物经凝胶电泳、割胶纯化后,将纯化的RT-PCR产物用Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,与同样经Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切的pcDNA3.1（+）载体连接形成重组载体pcDNA3.1（+）/hPPARγ2。筛选出阳性克隆,通过限制性内切酶酶切鉴定后对其DNA序列进行测序。 结果:从脂肪组织RNA中扩增得到1518bp目的基因片段。重组质粒被限制性内切酶切为两条带,一条为1518bp（hPPARγ2）,一条为5400bp（空载体pcDNA3.1）,片段的大小与理论值相符。RT-PCR扩增的hPPARγ2经荧光测序,其结果与Genbank上hPPARγ2序列完全相同。 结论:成功克隆了人PPARγ2基因全长cDNA并成功构建了人PPARγ2的真核表达重组体pcDNA3.1（+）/hPPARγ2。
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