论文摘要
磁共振免疫成像(Magnetic resonance immunoimaging, MRII )通过抗体与抗原特异性结合的原理,以单克隆抗体为载体,将顺磁性造影剂导入到肿瘤内,实现肿瘤靶向特异性强化。运用这种靶向抗体造影剂可以对大肠癌进行特异性诊断。本研究采用抗血管内皮生长因子抗体标记超顺磁性氧化铁纳米颗粒(Superparamagnetic iron oxide particle, SPIO ),制作出具备免疫活性的靶向造影剂,探讨该靶向造影剂在大肠癌特异性诊断中的价值和意义。目的:1.探讨磁共振免疫成像对比剂合成的原理方法及抗体造影剂的物理及生化性状。2.探讨抗体造影剂与人结肠癌细胞结合后的免疫学活性。3.探讨抗体造影剂对体外人结肠癌细胞结合后在大肠癌特异性诊断中的价值和意义。方法:1、采用化学交联法制备抗体造影剂。应用透射电镜观察抗体造影剂的粒径;应用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳及磁共振扫描仪检测抗体造影剂的生化及磁学特性。2、培养人结肠癌SW620细胞,应用免疫细胞荧光检测细胞VEGF的表达;将抗体造影剂与SW620细胞体外37℃孵育后,应用免疫细胞学方法及普鲁士蓝染色法检测其体外结合情况。3、将抗体造影剂与人结肠癌SW620细胞在37℃分别孵育30分,60分,90分后进行磁共振扫描,并做普鲁士蓝染色验证;以最佳孵育时间为标准与骨髓间充质干细胞对照检测抗体造影剂的靶向增强作用。结果:1、通过透射电镜以及十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析证明SPIO与VEGF抗体有效结合在一起,抗体造影剂的活性及弛豫率未发生明显变化。2、免疫细胞荧光检测SW620细胞中VEGF高度表达;免疫细胞学方法及普鲁士蓝染色法证明抗体造影剂具有免疫学活性并可和SW620细胞结合。3、磁共振扫描检查证明抗体造影剂孵育大肠癌细胞不同处理组之间T2信号强度值差别有统计学意义(P<0.05),在孵育60分后T2WI及T2*WI信号强度值降低最明显。且抗体造影剂孵育大肠癌细胞组与干细胞组比较存在显著性差异(P<0.05),抗体造影剂孵育大肠癌细胞组T2WI及T2*WI信号强度显著降低。结论:本实验成功构建了具有良好的理化性质和免疫活性的抗VEGF抗体造影剂,体外细胞结合实验及磁共振体外细胞扫描证明其具有靶向增强效果。该抗体造影剂为大肠癌的特异性诊断提供了基础,为肿瘤抗血管生成的治疗提供了新思路。
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