论文摘要
目的 （1）构建大鼠胰岛素原（proinsulin）基因的真核细胞表达质粒,并将其分别导入糖尿病（DM）大鼠体内和非胰岛β细胞内,探讨胰岛素原转基因治疗对糖尿病大鼠血糖的调节作用。（2）构建基因工程类胰岛β细胞系。 方法 （1）从大鼠胰腺组织中提取总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法获得大鼠胰岛素原基因cDNA全长序列,并经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切后,应用基因重组和分子克隆的方法与真核细胞表达质粒pCMV-Script Vector构建重组表达质粒pCMV/proinsulin。（2）链脲佐菌素（STZ）诱导SD大鼠糖尿病模型,分别用门静脉注射及肌肉注射的方法将重组表达质粒pCMV/proinsulin DNA裸质粒导入糖尿病大鼠模型以观察其血糖的变化。门静脉注射治疗组（A组）大鼠接受pCMV/proinsulin DNA 100μg/鼠,对照组（B组）给予同等剂量pCMV空载质粒DNA;肌肉注射治疗组（C组）大鼠接受pCMV/proinsulin DNA 100μg/鼠,对照组（D组）给予同等剂量pCMV空载质粒DNA。同时设立DM对照组（DM组）和正常对照组（N组）。采用超敏放免法检测大鼠转基因治疗前后胰岛素浓度的变化,用RT-PCR法检测治疗后大鼠肝脏、骨骼肌、胰腺等组织胰岛素原基因mRNA的表达情况,以免疫组化方法分析胰岛素原基因治疗对大鼠肝脏、骨骼肌、胰腺等组织内胰岛素含量的影响。（3）利用脂质体转染的方法将重组质粒pCMV/proinsulin转染到小鼠肠道上皮细胞
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