论文摘要
目的:研究苏木中化学成分,对苏木中主要成分进行体外抗肿瘤活性筛选,并对活性成分进行体外抑制拓扑异构酶Ⅰ活性筛选。通过本课题以期能发现苏木中抗肿瘤有效成分,并探讨其抗肿瘤作用机理。方法:（1）化学成分研究:对苏木的95%乙醇提取物进行有机溶剂萃取,将正丁醇萃取部位上硅胶柱,进行反复色谱层析,分离得到各化学成分。采用核磁共振、质谱、红外等波谱学方法,对化合物进行结构鉴定。（2）体外抗肿瘤活性研究:将不同浓度的受试样品加入到处于指数生长期的人白血病HL-60和人脑胶质瘤SWO-38细胞培养孔中,共培养24小时,24小时后,向每孔加入CCK-8,继续培养2.0 h,终止反应后,用酶标仪于450 nm波长处测定吸光值,通过计算,获得各化合物体外抑制肿瘤细胞生长活性的大小。（3）体外抑制人拓扑异构酶Ⅰ活性研究:在共20μL hTopoⅠ样品反应体系中,加入0.5μL受试样品,加有4μL反应缓冲液,0.5μg负超螺旋pBR322及1U的拓扑异构酶Ⅰ,同时做空白对照,阴性对照以及阳性对照。37℃恒温水浴反应30 min,加入4μL拓扑异构酶Ⅰ反应终止液,继续培育30 min。用1%琼脂糖,在TBE中用约5V/cm电压于室温电泳50 min。电泳完毕,用0.5%的溴化乙锭染色30min,再用去离子水漂洗,用凝胶成像系统分析各受试样品对拓扑异构酶Ⅰ的抑制活性。结果:（1）从苏木正丁醇萃取物中共分离到14个化合物,分别是:3′-去氧-4-甲氧基表苏木黄素（3’-deoxy-4-O-methylepisappanol）、（+）-南烛木树脂酚[（+）-lyoniresinol]、（+）-(8S,8′S-bisdihydrosiringenin、原苏木素A（protosappanin A）、原苏木素B（protosappanin B）、异原苏木素（isoprotosappanin B）、苏木查尔酮（sappanchalcone）、3-去氧苏木查尔酮（3-deoxysappanchalcone）、苏木酮B（sappanone B）、3-去氧苏木酮B（3-deoxysappanone B）、巴西苏木素（brazilin）、3′-O-甲基巴西苏木素（3′-O-methvlbrazilin）、氧化苏木素（brazilein）和棕榈酸（palmitic acid）。（2）苏木查尔酮、氧化苏木素和3-去氧苏木查尔酮对HL-60和SWO-38肿瘤细胞均有一定的抑制活性,其中氧化苏木素和3-去氧苏木查尔酮对HL-60的半数毒性浓度(TC50)分别为19.05和55.44μM。苏木查尔酮、氧化苏木素和3-去氧苏木查尔酮对SWO-38细胞的TC50值分别为398.77、128.80、340.44μM,同条件下阳性药物阿霉素对SWO-38的TC50值为189.57μM。体外抗肿瘤试验结果表明,在上述3个化合物中,氧化苏木素具有更好的抗肿瘤活性。（3）通过体外研究,发现氧化苏木素有抑制拓扑异构酶Ⅰ活性,其最小抑制浓度小于100μg/mL。苏木查尔酮和原苏木素A的抑制效果不明显。结论:（1）根据苏木中分离到的主要化合物分子骨架的差异,将其分为5个类型,分别是苏木素类（巴西苏木素、3′-O-甲基巴西苏木素、氧化苏木素）、原苏木素类（原苏木素A、原苏木素B、异原苏木素）、高异黄酮类（3′-去氧-4-甲氧基表苏木黄素、苏木酮B、3-去氧苏木酮B）、苏木查尔酮类（苏木查尔酮、3-去氧苏木查尔酮）和苯丙素类[（+）-南烛木树脂酚、（+）-（8S,8′S）-bisdihydrosiringenin]。（2）3′-去氧-4-甲氧基表苏木黄素为一新化合物,（+）-（8S,8′S）-bisdihydrosiringenin也是首次从苏木科植物中发现。（3）氧化苏木素较苏木查尔酮和3-去氧苏木查尔酮有更高的抗肿瘤活性,其对HL-60和SWO-38细胞的半数毒性浓度(TC50)分别为19.05和128.80μM;氧化苏木素显示弱的拓扑异构酶Ⅰ抑制活性,其最小抑制浓度小于100μg/mL,苏木查尔酮和原苏木素A均未表现明显的拓扑异构酶Ⅰ抑制活性本论文的研究表明,氧化苏木素可能是苏木抗肿瘤的主要成分,这是因为:一方面氧化苏木素在苏木中的含量较高,二是由于该分子结构接近平面,与拓扑异构酶抑制剂结构近似,研究结果也表明其具有抑制拓扑异构酶Ⅰ的活性。氧化苏木素通过抑制拓扑异构酶产生抗肿瘤活性可能是苏木抗肿瘤作用的主要机理之一。
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