硫辛酰维格列汀大鼠体内药代动力学及体内代谢研究

论文摘要

硫辛酰维格列汀为首次合成的二肽基肽酶Ⅳ抑制剂类化合物,初步药理实验证明其具有降低大鼠血糖的作用,本文旨在研究其临床前药代动力学性质及代谢情况,以揭示药物体内处置情况,为药物的进一步研究开发奠定基础。1.本文建立了测定大鼠血浆中硫辛酰维格列汀的液相色谱-串联质谱方法,该方法选择性好,灵敏度高。采用液液萃取法由血浆中提取待测物与内标苯海拉明,色谱分析采用Shim-pack VP-ODS柱（5μm粒径,150 mmx2.0mm I.D.）,流动相为甲醇-5 mM乙酸铵（80：20,V/V）,流速为0.2 mL/min。通过电喷雾离子化质谱的正离子多反应监测模式进行检测,待测物与内标的定量离子对分别为492.3→189.0和m/z 256.2→167.3。在2.00～500 ng/mL浓度范围内线性良好,定量下限为2.00 ng/mL,批内、批间精密度（以相对标准偏差表示）均小于15%,准确度（以相对误差表示）在±15%以内。2.该方法成功应用于大鼠血浆中硫辛酰维格列汀的测定及药代动力学研究。大鼠禁食过夜后,分三剂量（25,50和100 mg/kg）灌胃给予硫辛酰维格列汀,峰浓度为63.9～296μg/L,药时曲线下面积为260～1214μg/L,两者均与剂量成比例。达峰时为1.25～1.84 h,表观清除率为100 L/h/kg左右。在25～100 mg/kg的剂量范围内,大鼠单次口服硫辛酰维格列汀后呈现线性药代动力学特征,硫辛酰维格列汀呈现很高的表观清除率（86～105L/h/kg）和表观分布容积（364～711L/kg）,说明硫辛酰维格列汀的生物利用度可能较低,或者其在大鼠体内分布广泛或在组织中聚积,导致血药浓度较低。3.本文利用液相色谱与三重四级杆质谱研究了硫辛酰维格列汀在大鼠体内的代谢情况况,在尿液与胆汁中发现五种代谢物。在单次给予硫辛酰维格列汀之后,收集大鼠尿液与胆汁样本,用固相萃取法提取,经色谱分离后,收集相应时间段的流出物,浓缩之后进行分析定性。所发现的五种代谢物情况如下：M2为金刚烷环羟基化的代谢物,M5为1,2-二硫戊环开环后双甲基化的代谢物,M7为硫辛酸侧链羟基化的代谢物,M8为硫辛酸侧链双羟基化的代谢物,M9为硫辛酸侧链与金刚烷环同时羟基化的代谢物。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 1. DPP Ⅳ
• 1.1 DPP Ⅳ的基因定位及结构
• 1.2 DPP Ⅳ在血糖调节方面的作用
• 2. DPP Ⅳ抑制剂
• 2.1 DPP Ⅳ抑制剂的临床治疗研究
• 2.2 DPP Ⅳ抑制剂的安全性及耐受性
• 2.3 DPP Ⅳ抑制剂的药代动力学及代谢研究
• 第一章 大鼠血浆中硫辛酰维格列汀定量分析方法的建立
• 1.1 材料与仪器
• 1.1.1 药品与试剂
• 1.1.2 试验仪器
• 1.1.3 实验动物
• 1.1.4 溶液配制
• 1.2 质谱条件与质谱分析
• 1.3 色谱条件
• 1.4 血浆样品处理
• 1.5 方法学确证
• 1.5.1 专属性验证
• 1.5.2 最低定量限与线性范围
• 1.5.3 提取回收率
• 1.5.4 基质效应
• 1.5.5 精密度与准确度
• 1.5.6 稳定性
• 1.6 讨论
• 1.6.1 质谱条件的选择优化
• 1.6.2 血浆样本预处理方法
• 1.6.3 内标的选择
• 1.6.4 色谱条件的选择
• 1.7 小结
• 第二章 硫辛酰维格列汀大鼠体内药代动力学研究
• 2.1 材料与仪器
• 2.2 试验设计与样品采集
• 2.3 质谱色谱条件
• 2.4 未知样本测定
• 2.5 结果分析处理
• 2.6 结果
• 2.7 讨论
• 2.8 总结
• 第三章 硫辛酰维格列汀大鼠体内代谢物研究
• 3.1 材料与仪器
• 3.2 试验与给药方案
• 3.3 样本处理方法
• 3.4 质谱条件
• 3.5 色谱条件
• 3.6 代谢物定性分析
• 3.6.1 研究思路
• 3.6.2 LAVD可能的代谢方式推断
• 3.6.3 空白样本与给药后样本中可能代谢物的分段全扫描结果
• 3.6.4 给药后样本中可能的代谢物母离子扫描结果
• 3.6.5 代谢物的母离子、子离子扫描及图谱解析
• 3.6.6 代谢物碎片离子解析
• 3.7 讨论
• 3.7.1 提取方法的选择
• 3.7.2 色谱条件的选择
• 3.7.3 能代谢物的推测确证
• 3.8 总结
• 全文总结
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 学位论文评阅及答辩情况表