论文摘要
背景与目的： 端粒酶是一种以自身的RNA组分为模板，逆转录合成端粒末端串联重复序列的核糖核蛋白。端粒酶的表达水平与恶性肿瘤的发生、发展、转移及预后有着高度相关性。人端粒酶有三个重要组成部分，即端粒酶RNA组分（Human Telomerase RNA，hTR），在端粒DNA合成中充当模板的作用；蛋白质亚单位，即端粒酶相关蛋白（Human Telomerase Associated Protein I，hTEPI）；催化亚单位，即端粒酶逆转录酶（hTERT），被认为是端粒酶活性的限制性因素。研究显示，80％-90％的人恶性肿瘤组织端粒酶活性阳性，并且与hTERT mRNA活性相一致，表明hTERT基因表达对肿瘤组织端粒酶活性起决定性作用。而除干细胞、激活的淋巴细胞和生殖细胞外绝大多数组织细胞没有端粒酶活性。端粒酶活性的重建是肿瘤多步发生的重要分子事件，同时也是肿瘤治疗的重要靶点。近年有关hTERT在肿瘤免疫和治疗中的研究已成热点。为探讨hTERT作为肿瘤疫苗的可行性，作者将hTERT部分基因片段克隆入真核表达载体pEGFP-C3中，进行了筛选和鉴定，并进一步将其转染真核细胞NIH3T3，观察转染效果，为进一步研究基于hTERT的疫苗奠定基础。方法： 用RT-PCR方法从肝癌组织中提取总RNA扩增出hTERT基因片段，将其连接在pGEM-TEasy质粒上，转化JM109，用pGEM-T质粒上T7／SP6序列设计出的引物对连接的正确性进行鉴定，利用Amp抗性对阳性进行筛选，并进行DNA测序，以保证克隆的目的片段的正确性。将重组质粒pGEM-T-hTERT和
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标签：人端粒酶逆转录酶论文; 增强型绿色荧光蛋白论文; 真核表达论文;