兔卵丘细胞对卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响

论文摘要

颗粒细胞(CCs)对卵母细胞减数分裂成熟、受精及胚胎发育能力方面的作用在牛、羊、猪、小鼠等动物上已有报道,但是在兔上研究较少。目前仅有关于对兔卵丘细胞卵母细胞复合体(COCs)成熟培养的报道,尚未见颗粒细胞与卵母细胞相互作用的报道。兔是重要的实验动物,其卵母细胞是胚胎工程技术操作的重要材料。本论文以新西兰兔为实验动物研究了颗粒细胞对卵母细胞核成熟、胞质成熟以及卵母细胞存活和退化等方面的影响作用。采集兔 COCs 和裸卵(NOs)。将 COCs 脱去部分或全部卵丘细胞,形成放射冠包裹的卵母细胞(COs)或机械裸卵(DOs)后,分五种方式培养,即卵丘细胞包裹的卵母细胞(CEOs)的单独培养、COs 单独培养、DOs 与 COCs 共培养(DOs(COCs))、DOs与卵丘颗粒细胞共培养的(DOs (CCs)),以及 DOs 单独培养,培养 24 h 或 30 h 后,统计核成熟率。对核成熟的卵母细胞孤雌激活后用卵裂率判断卵母细胞成熟效果。得到如下结果:(1) 培养 24 h,上述五种培养方式的卵母细胞核成熟率分别为 76%、46%、13%、7%和 6%,前四种都有显著差异(P<0.05)。孤雌激活后卵裂率分别为 68%、63%、35%、21%和 17%,前两种培养方式均高于后三种培养方式。 (2) 培养 30 h, 上述五种培养方式核成熟率分别为 82%、62%、24%、16%和 7%,都有显著差异(P<0.05)。孤雌激活后的卵裂率分别为 79%、76%、61%、45%和 28%,前两种培养方式显著高于后三种培养方式(P<0.05)。(3) 培养时间从 24 h 延长至 30 h,DOs(COCs)的核成熟率显著提高(13% vs 24%,P<0.05),孤雌激活后的卵裂率也显著提高(35% vs 61%,P<0.05)。DOs(CCs)的核成熟率显著提高(7% vs 16%,P<0.05),但胞质成熟率无显著差异(P>0.05)。(4) NOs 和 NOs (CCs)成熟 24 h,核成熟率都为 2%,培养至 30 h,NOs 和 NOs (CCs)核成熟率分别为 2%和 3%,无显著差异(P>0.05)。(5) 培养 24 h,CEOs 、COs、DOs(COCs)、DOs (CCs)和 DOs 退化率分别为 7%、23%、44%、64%和 73%,相互间差异均显著(P<0.05);培养至 30 h,退化率分别为 12%、20%、41%、60%和 77%,相互间均差异显著(P<0.05)。但培养 24 h 与培养 30 h,相同培养方式下卵母细胞退化率均无显著差异(P>0.05)。以上结果表明,兔卵丘颗粒细胞直接影响卵母细胞核和细胞质的成熟,以及卵母细胞的存活;兔卵母细胞体外成熟时间从 24 h 延长到 30 h,有利于胞质成熟;裸卵不具有恢复减数分裂成熟的能力,也不能通过与颗粒细胞悬液共培养得到改善。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写中英文对照
• 文献综述
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂以及溶液的配制方法
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 兔超排与卵巢回收
• 1.5 COCs和NOs的收集与处理
• 1.6 卵丘颗粒细胞收集与处理
• 1.7 MII 期卵母细胞孤雌激活与胚胎培养
• 1.8 实验设计
• 1.9 统计分析
• 2 结果
• 2.1 成熟培养24 h 后卵母细胞成熟率和退化率比较
• 2.2 成熟培养30 h 后卵母细胞成熟率和退化率比较
• 2.3 成熟培养24 h 和30h 后卵母细胞成熟率和退化率比较
• 2.4 培养24 h 的处于 MⅡ期卵母细胞经孤雌激活后卵裂率比较
• 2.5 培养24 h 的处于 MⅡ期卵母细胞经孤雌激活后卵裂率比较
• 2.6 培养24 h 或30 h 的处于 MII 期卵母细胞孤雌激活后卵裂率变
• 3 讨论
• 3.1 卵丘颗粒细胞与卵母细胞核成熟
• 3.1.1 间隙连接与卵母细胞核成熟
• 3.1.2 卵丘颗粒细胞分泌的因子与核成熟
• 3.2 孤雌激活与胚胎发育
• 3.3 颗粒细胞与卵母细胞存活与退化
• 4 结论
• 5 论文参考文献
• 6 附图
• 7 致谢