论文摘要
据国内外研究表明新近发现的凋亡抑制因子IAP家族的新成员livin（ML-IAP/KIAP）在多种恶性肿瘤中呈现高表达,对多种恶性肿瘤的发生发展起重要作用。在我们以前的研究中已经证实livin在膀胱癌组织中呈现高表达,而在正常膀胱组织中不表达,初步研究表明livin对膀胱癌的发生发展起到重要作用。目的:本实验通过对两种膀胱癌细胞系（EJ和BIU-87）中livin基因的表达情况进行检测,进一步证实其与膀胱癌发生发展的关系,并为进一步使用分子生物学技术人为干涉livin基因表达以便更加深入的研究livin在膀胱癌生物学特性中所起的作用筛选有livin高表达的膀胱癌细胞系。方法:人膀胱癌细胞系EJ和BIU-87培养于含10%进口胎牛血清的DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）培养基中,（1）使用RT-PCR的方法分别对两种膀胱癌细胞系中livin基因的转录产物livin mRNA进行检测,并比较两种膀胱癌系胞系中livin mRNA的高低。（2）使用免疫细胞化学的方法对两种膀胱癌细胞系中livin基因的翻译产物livin因子进行检测,通过两种细胞系的免疫细胞化学染色情况比较翻译产物的高低。通过对RT-PCR和免疫细胞化学两项指标分析livin基因在两种膀胱癌细胞系中的表达情况。结果:RT-PCR结果提示livin mRNA在两种膀胱癌细胞系中均有不同程度的的表达,比较两种细胞系PCR产物电泳条带可以发现EJ细胞组条带略强于BIU-87细胞组,说明EJ细胞系livin mRNA表达较BIU-87细胞系中livin mRNA高。免疫细胞化学染色结果显示:两种细胞系染色均为阳性,EJ细胞组染色普遍较BIU-87细胞组染色深,与两种细胞系livin mRNA的RT-PCR结果一致。通过RT-PCR和免疫细胞化学两种方法对两种膀胱癌细胞系中livin基因的转录产物livin mRNA和翻译产物livin因子两项指标的检测结果表明:两项指标在两种膀胱癌细胞系中均有表达,EJ膀胱癌细胞系的表达较BIU-87膀胱癌细胞系高。结论:在我们以前的实验中使用RT-PCR的方法对36例膀胱癌标本进行分析发现livin阳性表达有28例,阳性率为78%。livin表达在不同病理分级、临床分期、肿瘤数量、复发次数间差异无统计学意义。12例正常膀胱组织livin均为阴性表达,TCC组和对照组livin表达差异有统计学意义。本实验通过对两种膀胱癌细胞系进行进一步的体外细胞实验,RT-PCR结果和免疫细胞化学结果均表明livin在两种膀胱癌细胞系中均有表达,进一步验证凋亡抑制因子livin在膀胱癌的发生发展以及对膀胱癌细胞的生长代谢和膀胱癌对膀胱内灌注化疗药物的耐药性等多方面都有可能起到重要作用,livin可能成为新的膀胱癌肿瘤标记物。通过比较两种细胞系的RT-PCR和免疫细胞化学结果表明EJ细胞系中livin的表达较BIU-87细胞系高,可以作为进一步研究livin在膀胱癌生长、凋亡以及膀胱癌化疗药物耐药性等方面所起的作用的理想细胞系,livin有望成为膀胱癌基因干预治疗的新靶点。