辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及其机制的研究

论文摘要

目的:观察辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响,探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制。方法:10μmol/L, 20μmol/L,30μmol/L不同浓度辛伐他汀作用K562细胞72h后:1.采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化。2.应用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。3. DNA Ladder实验检测细胞凋亡条带。4.激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度。5.用线粒体分离试剂分离出胞浆蛋白、微粒体蛋白、线粒体蛋白。6. RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Bak、IP3R、SERCA、GRP78、caspase-9,-7、-6、-3、GADD153、Calpain、MAGEA-3基因mRNA表达。7. Western blot检测GRP78、Calpain、Caspase-3,-6,-7,-9,-12、GADD13、细胞色素C蛋白水平。结果:1.辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡,其作用具有浓度依赖性。2. AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测结果显示,10μmol/L, 20μmol/L,30μmol/L辛伐他汀作用K562细胞72h能诱导其凋亡,细胞凋亡率分别为（12.41±0.32）%,（19.08±0.26）%和（23.41±0.36）%,与对照组（4.2±0.19）比较,差异具有统计学意义（P<0.01）。3.辛伐他汀作用K562细胞后出现典型的凋亡细胞形态学改变,包括核固缩、核碎裂和凋亡小体形成等,同时DNA凝胶电泳可见典型的DNA Ladder。4.辛伐他汀作用K562细胞后细胞内Ca2+浓度增加,荧光强度分别为（43±2.9）,（54±2.7）,（64±2.6）,与对照组（36±2.7）比较,差异具有统计学意义（P<0.01）。5. RT-PCR检测结果显示: Bax、Bak、IP3R、SERCA、GRP78、caspase-9,-7、-6、-3、GADD153、Calpain基因表达均有不同程度上调,而Bcl-2、MAGE -3基因表达均有不同程度下调。6. Western blot检测显示:Calpain、Caspase-3,-6,-7,-9,-12剪切活化、GRP78、GADD153表达增强,caspase-12定位于内质网,细胞色素C从线粒体释放。结论:1.辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡,其作用具有浓度依赖性。2.辛伐他汀可能通过下调Bcl-2,上调Bax、Bak、IP3R、SERCA来控制内质网Ca2+渗透并诱导K562细胞凋亡。3.辛伐他汀可能通过上调GADD153,下调MAGE -3 mRNA表达诱导K562细胞凋亡。4.辛伐他汀可能通过上调caspase-9,-7、-6、-3 mRNA表达并激活caspase-12蛋白进而活化caspase-9,-7,-6,-3蛋白诱导K562细胞凋亡。5.GRP78 mRNA及蛋白表达上调和caspase-12蛋白剪切活化表明,辛伐他汀可能通过内质网途径诱导K562细胞凋亡。6.本研究较深入地探讨了辛伐他汀抗慢性粒细胞白血病机制,为临床治疗提供了一定的理论依据。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 辛伐他汀诱导K562 细胞凋亡
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二部分 辛伐他汀调节K562 细胞Ca2+的分子机制
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第三部分 辛伐他汀通过内质网应激途径诱导K562 细胞凋亡
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士期间发表文章