论文摘要
目的:糖尿病肾病是糖尿病代谢异常引发的肾小球硬化症,是导致慢性肾衰竭（chronic renal failure, CRF）的主要原因之一,国内外肾脏病学者在不断探索糖尿病肾病的发病途径及治疗方法,而中医药以其独特的优势,在糖尿病肾病的防治中,占有重要地位。本研究通过首先建立糖尿病（Diabetes Mellitus DM）动物模型,进而发展为糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy DN）,应用雪芪通肾汤对该模型进行干预性治疗,通过观察实验动物的24小时尿蛋白定量、糖化血红蛋白、血脂、肾功能、肾脏病理形态学变化以及肾组织中TGF–β1/p38MAPK信号转导通路的变化,观察雪芪通肾汤对糖尿病肾病的治疗作用及探讨其可能机制,为其临床推广应用提供实验基础和理论依据。方法:选用清洁级健康雄性SD大鼠46只,体重200±10g,普通饲料适应性喂养一周,代谢笼取尿检测尿糖和尿蛋白均为阴性,按体重随机分为正常组（Normal）10只,模型组（Model）、贝那普利组（Benazepril）、雪芪通肾组（XQTS）各12只。除正常组外,其余各组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ） 60 mg/kg,正常组注射相应量生理盐水,72小时后测血糖,以≥16.7mmol/L为DM模型成模标准。造模各组在DM模型成模后,按血糖水平重新分组,组别与动物数不变。治疗各组在成模后一周开始按成人剂量的20倍给药,每日一次。雪芪通肾组按26g /kg予雪芪通肾汤,贝那普利组按10mg/kg灌胃,各组共给药23周;正常组和模型组均灌服相应量的生理盐水。于DM成模后第24周末禁食不禁水留取各组大鼠24小时尿液测定24小时尿蛋白定量;而后麻醉动物,取血检测各组大鼠糖化血红蛋白（HbA1C）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;摘取肾脏称重计算肥大指数,光镜下观察病理形态学变化,免疫组织化学法检测肾组织TGF-β1表达情况,RT-PCR检测肾组织TGF-β1、p38MAPKmRNA的表达,所有数据均用均数±标准差（Mean±S）表示,采用单因素方差分析对实验结果进行统计学分析,数据统计分析应用SPSS统计软件完成。结果:1实验大鼠的一般状况正常组大鼠饮食正常,眼睛有神,反应敏捷,被毛紧披,肌肉丰满,粪便呈麦粒状,尿量正常。其余3组注射STZ后,均出现明显的多饮、多食、多尿症状,并慢慢出现精神萎靡,反应迟钝,少动抱团。实验最后一周,与正常组相比,造模各组大鼠明显体型瘦小,骨骼突出,肌肉偏少,上述症状以模型组最为显著。治疗期间造模各组均有大鼠死亡情况,其中模型组死亡3只,贝那普利组死亡1只,雪芪通肾组死亡1只,死亡原因估计为高血糖引起代谢紊乱最终导致脏器衰竭。2各组大鼠体重、右肾重、肥大指数（肾重/体重）的比较模型组、贝那普利组、雪芪通肾组大鼠体重比正常组明显偏轻（P<0.01）,而三个造模组各组之间大鼠体重无显著性差异（P>0.05）;正常组与造模各组大鼠右肾重无显著性差异（P>0.05）;模型组、贝那普利组、雪芪通肾组大鼠肥大指数与正常组相比明显偏高（P<0.01）,而模型组与两个治疗组之间无显著性差异（P>0.05）。3各组大鼠24小时尿蛋白定量的比较24小时尿蛋白定量,模型组、贝那普利组、雪芪通肾组与正常组比较均有显著升高（P<0.01）,贝那普利组、雪芪通肾组与模型组比较明显降低（P<0.01）,而贝那普利组、雪芪通肾组之间无显著区别（P>0.05）。4各组大鼠糖化血红蛋白（HbA1C）的比较模型组、贝那普利组、雪芪通肾组各组大鼠糖化血红蛋白比正常组明显升高（P<0.01）,而模型组、贝那普利组、雪芪通肾组之间无显著性差异（P>0.05）。5各组大鼠血脂的比较造模各组血清总胆固醇（TC）明显高于正常组（P<0.01）,雪芪通肾组则比模型组明显偏低（P<0.01）,而贝那普利组、模型组之间的比较无显著性差异（P>0.05）,对于甘油三酯（TG）,两个治疗组与正常组均低于模型组（P<0.01）,而两个治疗组与正常组比较无显著性差异（P>0.05）。6各组大鼠肾功能的比较两个治疗组与正常组的血肌酐（Scr）明显低于模型组（P<0.01）,与正常组相比,贝那普利组明显升高（P<0.05）,而雪芪通肾组与正常组之间无显著性差异（P>0.05）;对于尿素氮（BUN）,两治疗组与正常组也均明显低于模型组（P<0.01）,而与正常组比较,贝那普利组和雪芪通肾组的BUN则有所升高（P<0.01）,而两者之间的升高水平无显著性差异（P>0.05）。7肾脏病理形态学观察HE、PAS及Masson染色显示:正常组肾小球结构完整,未见肾小球肥大,肾小球毛细血管基底膜、系膜、基质未见明显异常改变;模型组可见肾小球肥大,肾小球毛细血管基底膜增厚,肾小球系膜细胞增生、系膜基质增多,系膜区增宽,肾间质有明显纤维化;贝那普利组与雪芪通肾组也均有不同程度病理改变,但与模型组相比病变较轻。8免疫组化检测结果TGF-β1主要表达于肾小球内,远端小管也有表达,但表达较弱。正常组中TGF-β1有弱表达,模型组和两个治疗组中表达增强。半定量分析结果显示,与正常组相比,模型组的表达要明显加强（P<0.01）,而两个治疗组的表达也强于正常组（P<0.01）,与模型组比较,贝那普利组和雪芪通肾组的表达要明显降低（P<0.01）,贝那普利组和雪芪通肾组之间的比较则无明显差异（P>0.05）。9 RT-PCR检测结果TGF-β1mRNA半定量分析结果显示,与正常组相比,模型组的表达要明显加强（P<0.01）,而两个治疗组的表达也强于正常组（P<0.05）,与模型组比较,贝那普利组和雪芪通肾组的表达要明显降低（P<0.05）,贝那普利组和雪芪通肾组之间的比较则无明显差异（P>0.05）。p38MAPKmRNA半定量分析结果显示,与正常组相比,模型组的表达要明显加强（P<0.01）,而两个治疗组的表达也强于正常组（P<0.01）,与模型组比较,贝那普利组和雪芪通肾组的表达要明显降低（P<0.01）,贝那普利组和雪芪通肾组之间的比较则无明显差异（P>0.05）结论:1雪芪通肾汤可以减少DN大鼠的尿蛋白;降低TC、TG,改善脂质代谢;降低Scr及BUN,保护肾功能。2雪芪通肾汤可以有效的抑制DN大鼠的肾小球毛细血管基底膜的增厚、系膜基质的增生,延缓肾脏病理的进展。3雪芪通肾汤可以抑制DN大鼠肾组织中TGF-β1、p38MAPK蛋白或mRNA的表达,提示其可通过阻断肾脏局部TGF-β1/p38MAPK信号转导通路发挥作用。
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相关论文文献
- [1].雪芪通肾汤对糖尿病肾病大鼠尿蛋白定量及TGF-β_1表达的影响[J]. 河南中医 2009(12)
- [2].雪芪通肾汤对糖尿病肾病大鼠肾功能及肾脏p38丝裂原活化蛋白激酶mRNA表达的影响[J]. 河北中医 2009(11)