OBESTATIN在仔猪不同阶段胃肠壁中的分布研究

论文摘要

Obestatin是在对胃生长素前体(Proghrelin)的基因序列进行生物信息学分析时发现的一种新的蛋白质,能够抑制动物的饥饿感,所以将其命名为肥胖抑制素。Ghrelin能够增加摄食,减少体内能量的消耗,可以参与体重的调节,导致体重的增加。Obestatin具有与Ghrelin截然相反的生物学作用,被认为是Ghrelin的生物学拮抗剂,可以和孤儿G蛋白GPR39受体结合,抑制食物摄取、胃排空、空肠的蠕动和体重的增加,因此在机体的能量平衡及体重调控的复杂机制中具有重要的生物学作用。国内关于Obestatin的研究多集中在Obestatin在人、大鼠的疾病模型中的血浆变化及其作用,在猪方面的研究还不多,至今未见相关文献报道。仔猪阶段是生猪代谢最旺盛的阶段,也是生长发育最迅速的阶段,是猪的养殖中最重要的阶段之一,Obestatin在仔猪阶段的研究对仔猪的应激预防和育肥具有十分重要的潜在价值。因此,本实验对Obestatin在仔猪不同阶段的胃肠道各部分中的分布情况进行检测,探索Obestatin在不同阶段胃肠道中的分布规律,为进一步深入研究Obestatin在仔猪消化系统和能量代谢中的作用以及深入全面认识仔猪胃肠黏膜的发育规律提供实验依据。本实验选取初生仔猪(1日龄)、哺乳仔猪(15日龄)、断奶仔猪(30日龄)和保育仔猪(45日龄),处死后依次分离采集胃底部、胃体部、胃窦部、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠各一段,4%中性多聚甲醛固定24h后制作组织蜡块,采用SP免疫组化试剂盒和DAB显色法,对各组织蜡块进行免疫组织化学染色检测,对检测结果拍照并进行分析。结果分析显示：(1) Obestatin在仔猪不同阶段体内胃肠各部分中的存在且广泛分布,其中整个胃肠道的黏膜上皮顶端、黏膜下层和浆膜层均有Obestatin的密集分布,且其存在量较多；同时,胃部的各部分胃壁的胃腺部、固有层、肌肉层和和肠道各段的肠壁的肠腺部、固有层、肌肉层分布量比黏膜上皮顶端、黏膜下层和浆膜层等处要少。(2)在初生仔猪胃肠道各段中,胃底部和结肠部的Obestatin分布相比其他部分广泛且数量多；在哺乳仔猪阶段,Obestatin在胃窦部和空肠分布比其他部分大量且广泛；在断奶仔猪阶段,Obestatin在胃底部、盲肠、结肠的分布要比其他部分量大并且宽泛；在保育仔猪阶段,Obestatin在胃底部、胃体部大量均匀分布,在胃窦部黏膜主要集中于黏膜上皮外侧；Obestatin在保育仔猪肠道的盲肠、结肠的肠壁分布要比其他肠段的肠壁多并且宽泛。(3)随着日龄的增加和发育阶段的变化,Obestatin在胃底部、胃体部、十二指肠、回肠、盲肠、结肠、直肠黏膜的分布逐渐增加的；Obestatin在胃窦部黏膜的分布表现出“先增加后集中”的趋势,上皮顶端的分布逐渐增加,固有层、胃底腺的分布逐渐减少,最后Obestatin在黏膜的分布大部分集中于上皮顶端,固有层的分布较少；仔猪断奶阶段十二指肠壁黏膜的Obestatin含量较哺乳和保育阶段高；Obestatin在空肠部黏膜的分布表现出“先增加后降低再恢复”的趋势,中间断奶阶段Obestatin的含量降低；Obestatin在保育阶段的结肠黏膜分布具有类似胃窦部的“集中”趋势,上皮顶端有大量Obestatin分布但固有层仍有较多Obestatin分布。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 縮略词表
• 第一部分 文献综述
• 1 脑肠肽
• 1.1 脑肠肽的发现及定义
• 1.2 脑肠肽的分类及特点
• 1.3 脑肠肽对胃肠道的作用
• 2 Obestatin研究进展
• 2.1 Obestatin的生物学特征和组织分布
• 2.2 Obestatin的受体
• 2.3 Obestatin的生物学功能
• 2.3.1 Obestatin对摄食与体重的影响
• 2.3.2 Obestatin对胃肠的影响
• 2.3.3 Obestatin对内分泌的影响
• 2.3.4 Obestatin的其他影响
• 2.4 Obestatin的研究前景和展望
• 3 仔猪阶段的划分及其特点
• 3.1 初生仔猪
• 3.2 哺乳仔猪
• 3.3 断奶仔猪
• 3.4 保育仔猪
• 4 免疫组织化学技术
• 4.1 免疫组织化学技术定义
• 4.2 免疫组织化学技术的分类
• 4.3 SP法的优点
• 4.4 免疫组织化学技术的应用
• 第二部分 实验研究部分
• 1 前言
• 2 实验材料
• 2.1 实验动物
• 2.2 主要试剂及耗材
• 2.3 主要仪器设备
• 2.4 主要溶液及配置
• 2.4.1 梯度浓度脱水酒精
• 2.4.2 其他常用溶液
• 2.5 组织包埋石蜡过滤备用
• 3 实验方法
• 3.1 实验器具的准备
• 3.2 实验动物的准备
• 3.3 取材与固定
• 3.4 组织蜡块制作
• 3.4.1 固定组织修整与水洗
• 3.4.2 脱水
• 3.4.3 透明
• 3.4.4 浸蜡
• 3.4.5 组织包埋
• 3.4.6 蜡块修整
• 3.5 组织切片
• 3.5.1 切片
• 3.5.2 展片
• 3.5.3 捞片
• 3.5.4 烘片
• 3.6 免疫组化染色
• 3.6.1 脱蜡和水化
• 3.6.2 灭活内源性酶
• 3.6.3 抗原修复
• 3.6.4 封闭
• 3.6.5 抗体孵育
• 3.6.6 显色
• 3.6.7 组织切片的复染
• 3.6.8 组织切片的脱水、透明
• 3.6.9 封片
• 3.7 实验结果观察与拍照
• 4 结果与分析
• 4.1 初生仔猪
• 4.1.1 胃底部
• 4.1.2 胃体部
• 4.1.3 胃窦部
• 4.1.4 十二指肠
• 4.1.5 空肠
• 4.1.6 回肠
• 4.1.7 盲肠
• 4.1.8 结肠
• 4.1.9 直肠
• 4.2 哺乳仔猪
• 4.2.1 胃底部
• 4.2.2 胃体部
• 4.2.3 胃窦部
• 4.2.4 十二指肠
• 4.2.5 空肠
• 4.2.6 回肠
• 4.2.7 盲肠
• 4.2.8 结肠
• 4.2.9 直肠
• 4.3 断奶仔猪
• 4.3.1 胃底部
• 4.3.2 胃体部
• 4.3.3 胃窦部
• 4.3.4 十二指肠
• 4.3.5 空肠
• 4.3.6 回肠
• 4.3.7 盲肠
• 4.3.8 结肠
• 4.3.9 直肠
• 4.4 保育仔猪
• 4.4.1 胃底部
• 4.4.2 胃体部
• 4.4.3 胃窦部
• 4.4.4 十二指肠
• 4.4.5 空肠
• 4.4.6 回肠
• 4.4.7 盲肠
• 4.4.8 结肠
• 4.4.9 直肠
• 5 讨论
• 5.1 实验结果讨论
• 5.1.1 不同阶段仔猪胃肠道Obestatin分布的比较分析
• 5.1.2 不同阶段仔猪胃肠道不同部位Obestatin分布的比较分析
• 5.2 实验技术讨论
• 5.2.1 组织标本的取材
• 5.2.2 组织标本的固定
• 5.2.3 组织标本的脱水
• 5.2.4 组织标本的浸蜡
• 5.2.5 组织标本的包埋
• 5.2.6 组织蜡块的切片
• 6 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录 （攻读硕士期间发表文章）