论文摘要
目的:研究曲古抑素A（TSA）人胎儿成纤维细胞（hEFs）OCT4启动子DNA甲基化和人类体细胞核移植（hSCNT）胚胎发育的影响方法:hEFs（3×105cells/90-mm dish）在贴壁培养48小时后更换新鲜hEFs培养基,并添加终浓度为50,100,200,300,400,500,600,700和800nM的TSA分别作用24,48和72小时,未加TSA处理的hEFs作为阴性对照。（1）采用细胞流式法检测细胞凋亡,评价TSA对hEFs的毒性作用与浓度和时间的关系;（2）应用免疫组化法及RT-PCR分析TSA对多能性转录因子OCT4表达的影响;（3）应用免疫组化法检测乙酰化组蛋白H3水平,评价TSA对组蛋白乙酰化水平的影响;（4）应用RT-PCR检测DNA甲基化转移酶1（DNMT1）mRNA的表达水平分析TSA在DNA甲基化方面的作用;（5）通过重亚硫酸盐PCR测序法（BSP）检测了OCT4基因启动子甲基化状态用于评价TSA对hEFsOCT4基因启动子甲基化状态影响;（6）利用50nM的TSA处理hSCNT,观察TSA对克隆胚发育的影响。结果:（1）TSA对hEFs细胞的毒性作用呈现浓度依赖性,随浓度增加细胞存活率降低;三个作用时间比较,TSA对hEFs的毒性作用无统计学差异;（2）免疫组化结果显示,TSA处理组细胞oct4蛋白的表达阴性;（3）RT-PCR结果表明,TSA处理组细胞OCT4mRNA阴性,与oct4蛋白免疫组化结果一致;（4）TSA能够明显提高组蛋白乙酰化水平;（5）TSA对DNMT1 mRNA的表达具有抑制作用,随TSA浓度增加抑制作用增强;（6）BSP结果显示,100nM TSA处理细胞48小时OCT4启动子DNA甲基化水平与非处理组相似,而与hES相比仍处于高度甲基化状态;（7）hSCNT重构胚激活后,用50nM TSA处理4小时,≥8细胞克隆胚胎形成率（36.8%）是非处理组（17.6%）的两倍;19个克隆胚胎经TSA处理后有两个发育到囊胚,而对照组17个克隆胚胎没有获得囊胚。结果表明,TSA能够介导组蛋白乙酰化并下调DNMT1的表达,但不能使hEFs OCT4去甲基化而重新激活。TSA处理克隆胚胎后能够促进胚胎发育。TSA提高组蛋白乙酰化水平及下调DNMT1 mRNA表达的作用可能是TSA促进hSCNT胚胎重编程的原因。
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- [3].Oct4和PI3K在胃癌组织中的表达变化及意义[J]. 山东医药 2016(34)
- [4].Oct4基因在消化系肿瘤中的研究进展[J]. 世界华人消化杂志 2013(28)
- [5].OCT4假基因在肿瘤中的研究进展[J]. 癌症进展 2018(12)
- [6].转录因子Oct4在非小细胞肺癌患者中临床表达的研究[J]. 世界最新医学信息文摘 2017(58)
- [7].胃癌组织Oct4和PI3K的表达和相关性[J]. 承德医学院学报 2016(03)
- [8].大肠癌中OCT4基因表达与CD44的关系[J]. 大家健康(学术版) 2013(17)
- [9].广西巴马小型猪Oct4基因克隆及其在成纤维细胞中的表达[J]. 中国兽医学报 2012(04)
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- [11].绵羊Oct4基因启动子序列的克隆及其与猪和牛序列的比较分析[J]. 湖南农业大学学报(自然科学版) 2016(05)
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- [14].Oct4在不同时期牛睾丸组织中的表达[J]. 畜牧与兽医 2011(01)
- [15].Oct4与结肠癌发生发展关系的研究进展[J]. 世界华人消化杂志 2015(33)
- [16].OCT4与妇科肿瘤[J]. 热带医学杂志 2013(02)
- [17].大肠癌肿瘤组织中干细胞关键转录因子Oct4的表达及意义[J]. 黑龙江医学 2009(01)
- [18].胃癌组织Oct4表达变化及意义[J]. 山东医药 2016(40)
- [19].焦磷酸测序法检测OCT4启动子在大鼠骨髓源性肝干细胞分化中的甲基化变化[J]. 生命科学研究 2016(02)
- [20].OCT4异构体在人胚胎干细胞和间充质干细胞中的表达[J]. 基础医学与临床 2014(01)
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