重组人促红细胞生成素对大鼠视网膜神经元缺血再灌注损伤的保护作用

重组人促红细胞生成素对大鼠视网膜神经元缺血再灌注损伤的保护作用

论文摘要

目的:制作Sprague-Dawley(SD)大鼠视网膜缺血再灌注(Retinal ischemia-reperfusion,RIR)损伤模型,探讨腹腔内注射重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对缺血再灌注损伤所致的大鼠视网膜神经元损伤的保护作用和其对热休克蛋白72(heat shock protein72,HSP72)表达的影响及其相互关系。方法:首先选择18只SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、RIR组,各6只,采用前房灌注的方式建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤(RIR)模型,灌注压为110mmHg,维持时间为1小时。摘除眼球作视网膜病理切片观察以及采用免疫组织化学法和原位末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)技术检测视网膜细胞的凋亡情况,同时对视网膜凋亡细胞进行计数并作统计学分析。随后选择78只SD大鼠,随机分组:正常组6只,EPO治疗组(采用腹腔注射rHuEPO)、EPO+槲皮黄酮组、缺血再灌注组各24只,均以右眼为实验眼。采用TUNEL技术分别测定正常对照组和各实验组大鼠再灌注12小时、24小时、48小时和72小时视网膜中热休克蛋白72及凋亡细胞的表达;观察各组大鼠视网膜病理学改变。结果:(1)正常组和假手术组大鼠视网膜偶见凋亡细胞,每高倍视野均数分别为0.83+0.753和1.00±0.632。RIR组大鼠视网膜中可见大量凋亡细胞,每高倍视野均数为30.33±2.160,差异具有极显著统计学意义(p<0.01)。(2)正常组大鼠的视网膜神经元中HSP72表达微弱,各实验组大鼠视网膜中HSP表达自再灌注12小时开始增强,24小时达到高峰,后逐渐减弱,72小时时表达稍高于正常。再灌注后各时间段,EPO组大鼠视网膜中HSP表达均高于RIR组,EPO+槲皮黄酮组(p均<0.05)。(3)正常大鼠视网膜中几乎没有凋亡细胞。再灌注后12小时,各实验组大鼠视网膜中可见凋亡细胞,24小时达高峰,48小时后凋亡细胞数逐渐减少;再灌注后各组大鼠视网膜中凋亡细胞数比正常组多(p均<0.05)。(4)再灌注后,RIR组、EPO+槲皮黄酮组大鼠内层视网膜明显水肿,炎症细胞侵入,膜结构逐渐破坏;EPO组大鼠视网膜结构保持相对完整,炎症细胞相对较少。结论:(1)通过前房灌注加压法成功制作RIR损伤动物模型。(2)RLR损伤后大鼠视网膜中存在大量的细胞凋亡。(3)HSP72在正常大鼠视网膜中表达微弱。RIR损伤后其表达增多。腹腔注射EPO可以明显的诱导大鼠视网膜中HSP72的表达增多。(4)EPO明显减少大鼠RIR损伤后视网膜细胞的凋亡,减少视网膜内炎症细胞的浸润,保护视网膜结构。(5)EPO对缺血再灌注损伤的视网膜具有明显的保护作用,其机制可能与使HSP72表达上调有关。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 论文正文
  • 第一部分 大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型的建立
  • 1 前言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 4 讨论
  • 5 结论
  • 第二部分 rHuEPO对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用
  • 1 前言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 4 讨论
  • 5 结论
  • 总结
  • 参考文献
  • 附图
  • 综述
  • 致谢
  • 攻读学位期间主要的研究成果
  • 相关论文文献

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