两种大型水母毒素的分离纯化及其蛋白酶活性和抗氧化活性的研究

论文摘要

水母在我国分布广,种类多,数量大,是一种丰富的海洋生物资源。已研究的水母毒素主要分布于触角和刺丝囊中,是一类结构新颖独特的肽类毒素。水母种类的不同,其毒素的结构、生物活性往往不同。本文报道了海蜇（Rhopilema esculentum Kishinouye）毒素和霞水母（Cyanea nozakii Kishinouye）毒素的提取、纯化、浓缩及其蛋白酶和抗氧化活性等方面的内容。为了有效提高海蜇毒素的浓度,用五种方法对海蜇毒素进行浓缩,结果表明:将毒素冷冻干燥,后用50 mmol/L磷酸缓冲溶液（PBS）溶解后的蛋白浓度是浓缩前毒素的4.6倍,回收率是34.9%;蛋白的种类没有发生变化;溶血活性变化不大,HU50为17.1μg/mL,浓缩前毒素的HU50为12.4μg/mL。用冰冻法和凝胶吸水法浓缩海蜇毒素得到的浓缩倍数还不到2。用DEAE Sepharose Fast Flow分离海蜇毒素,洗脱液为含0.4 mol/L NaCl的PBS （0.02 mol/L,pH 8.0）时,得到的组分中只含有一条蛋白条带,N末端测序分析得出该蛋白是组蛋白H4。凝胶层析法分离海蜇毒素,得到两个组分,而琼脂糖CM Sepharose Fast Flow分离海蜇毒素,得到5-9个组分。葡聚糖凝胶Sephadex G-50,G-100分离霞水母毒素,分别得到两个组分;琼脂糖DEAE Sepharose Fast Flow分离霞水母毒素,结果得到三个组分。海蜇毒素具有蛋白酶活性,并受温度,pH,金属离子等多种理化因子的影响。Zn2+、Mg2+、Mn2+均能增强海蜇毒素蛋白酶的活性,其中Mn2+的影响最大;EDTA对蛋白酶活性也有提高的作用;邻菲咯啉、甘油可以有效的抑制蛋白酶活性,其最大抑制率分别为87.5%和82.1%,可以作为海蜇毒素的蛋白酶抑制剂,以提高海蜇毒素的稳定性。霞水母毒素的蛋白酶活性较弱,甘油和蔗糖可以增加蛋白酶的活性,且浓度对活性的影响不明显。海蜇毒素有明显的抗氧化活性,可以有效的清除羟自由基, EC50为48.91μg/mL;清除超氧阴离子的能力更强, EC50为2.65μg/mL;其还原能力很弱,浓度为116.08μg/mL时,吸光度A700为0.014;但具有一定的螯合能力,其螯合能力最高为25.82%。霞水母毒素具有较强的清除羟自由基的能力,蛋白浓度为41μg/mL时,清除率可达到85%;霞水母毒素对超氧阴离子的清除作用较弱,蛋白浓度为77.7μg/mL时,清除率为48.6%;霞水母毒素有较强的还原能力,但螯合能力很弱。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 选题意义，主要内容
• 第一章 前言
• 第一节 水母的生物学特征
• 第二节 水母的食用和药用价值
• 第三节 水母毒素的研究进展
• 参考文献
• 第二章 海蜇毒素和霞水母毒素的理化性质研究及海蜇毒素浓缩方法的比较分析
• 第一节 海蜇毒素和霞水母毒素的提取及电泳分析
• 第二节 海蜇毒素和霞水母毒素的氨基酸分析
• 第三节 海蜇毒素浓缩方法的比较分析
• 参考文献
• 第三章 海蜇毒素和霞水母毒素的分离纯化
• 第一节 海蜇毒素的分离纯化
• 第二节 霞水母毒素的纯化
• 参考文献
• 第四章 海蜇毒素和霞水母毒素的蛋白酶活性和抗氧化活研究
• 第一节 海蜇毒素和霞水母毒素的蛋白酶活性研究
• 第二节 海蜇毒素和霞水母毒素的抗氧化活性研究
• 参考文献
• 第五章 结论
• 第六章 创新点
• 发表文章目录
• 致谢