Liguzinediol及其苯甲酰衍生物在大鼠体内的药代动力学研究

论文摘要

Liguzinediol（缩写为LZDO）,2,5-二羟甲基-3,6-二甲基吡嗪,是一种通过对川芎嗪进行结构修饰后得到的化合物,经实验研究发现,具有较好的正性肌力作用,能够治疗急性心衰等心血管疾病。课题组前期已经对其在大鼠体内的吸收、分布、代谢、排泄的药代动力学过程进行了研究,研究发现其吸收较快,体内分布广泛,但是半衰期较短,代谢速率较快,且在大鼠体内有较为明显的性别差异。Liguzinediol苯甲酰衍生物,2,5-二苯甲酰氧甲基-3,6-二甲基吡嗪,是为了延缓Liguzinediol在体内的代谢过程而在Liguzinediol的结构基础上通过结构修饰得到的具有良好正性肌力作用的化合物,用以作为Liguzinediol的前药。本文分别以Liguzinediol及其苯甲酰衍生物为研究对象,建立了LC-MS/MS的测定方法,对其在大鼠体内的药代动力学过程进行研究,以期通过二者的药动学特性的比较来评价Liguzinediol苯甲酰衍生物的成药性。本文研究内容主要包括以下两方面：一、Liguzinediol在雌雄大鼠体内的药代动力学研究1 LC-MS/MS法测定大鼠血浆中Liguzinediol浓度建立了大鼠血浆中Liguzinediol浓度的LC-MS/MS测定方法,为进一步探讨Liguzinediol在雌雄大鼠体内的药代动力学提供可靠的方法。血浆样品加入内标（咖啡因）,经甲醇沉淀蛋白后,高速离心,上清液使用0.22 μm微孔滤膜过滤后,进行LC-MS/MS分析。采用Shim-pack XR-ODS色谱柱（50 mm×2.0 mm,2.2μm）,流动相为甲醇-0.1%甲酸梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1,柱温40℃。质谱采用ESI离子源,多反应监测模式（MRM）进行正离子检测,Liguzinediol和内标咖啡因的选择性检测离子对分别为m/z 169.2→122.2和m/z 195.2→110.2, Liguzinediol与咖啡因能完全分离,内源性物质对其测定没有干扰。Liguzinediol的血药浓度在10.26～20520 ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9996）,提取回收率为75.60%-93.09%,日内精密度的RSD为1.214%～4.675%,日间精密度的RSD为2.195%-10.41%,最低检测限为0.02ng·mL-1。该方法操作简便、灵敏、快速、专属性强,符合生物样品分析要求。2 Liguzinediol在大鼠体内药代动力学的雌雄差异比较Sprague-Daswley大鼠36只,雌雄各半,随机分为6组,雌雄各3组,分别灌胃给药5.10,20 mg·kg-1的Liguzinediol后药时曲线经非房室模型拟合后,雌性大鼠的半衰期分别为1.55±0.223h、1.76±0.319h、1.82±0.227 h,雄性大鼠的半衰期分别为0.438±0.119 h、0.464±0.182h、0.384±0.185 h,雌性大鼠的曲线下面积AUC分别为13042±2033、 29214±5666、60173±6228μg·L-1·h,雄性性大鼠的曲线下面积AUC分别为2313±452、7797±3167、10726±3960 μg·L-1·h。Sprague-Daswley大鼠36只,雌雄各半,随机分为6组,雌雄各3组,分别静脉注射给药5、10、20 mg·kg-1的Liguzinediol后药时曲线经非房室模型拟合后,雌性大鼠的半衰期分别为1.43±0.467 h、2.122±0.282 h、1.98±0.369 h,雄性大鼠的半衰期分别为0.374±0.200 h、0.420±0.178 h、0.447±0.131 h,雌性大鼠的曲线下面积AUC分别为17484±2946、31434±3323、71644±8697μg-L-1·h,雄性大鼠的曲线下面积AUC分别为3436±964、6546±853、15946±2334μg·L-·h。3 Liguzinediol在大鼠体内的组织分布研究建立了LC-MS/MS的方法测定Liguzinediol在大鼠体内的分布,并测定了大鼠体内九个脏器（心、肝、脾、肺、肾、胃、肌肉、小肠、脑）4个时间点（10min、1、 2、8h）的Liguzinediol含量,进行了组织器官的分布研究。在静脉注射Liguzinediol 10 mg·kg-1后,发现药物能分布到大部分组织中,其中心脏、肌肉中分布较多,小肠及肝脏中分布较少,其它脏器分布较为均匀。脑组织中也能测得药物浓度,说明Liguzinediol可以通过血脑屏障。但是在给药2h后,各组织中的药物浓度明显降低,在8h后大部分组织中已经检测不到Liguzinediol,说明其在体内的分布较为迅速,且无蓄积。二、Liguzinediol苯甲酰衍生物的合成及药代动力学研究1 Liguzinediol苯甲酰衍生物的合成以Liguzinediol为原料,与苯甲酰氯在吡啶作为催化剂的条件下,通过加热回流反应,合成2,5-二苯甲酰氧甲基-3,6-二甲基吡嗪,结构经紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）、核磁共振（NMR）和质谱（MS）等确证。通过离体心脏灌流手术,验证其药理活性。2 Liguzinediol及其苯甲酰衍生物的药代动力学研究建立了同时测定大鼠血浆中Liguzinediol,及其苯甲酰衍生物浓度的LC-MS/MS测定方法。血浆样品加入内标（咖啡因）,经甲醇沉淀蛋白后,高速离心,上清液使用0.22 μm微孔滤膜过滤后,进行LC-MS/MS分析。采用Shim-pack XR-ODS色谱柱（50mm×2.0mm,2.2 μm）,流动相为甲醇-0.1%甲酸梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1,柱温40℃。质谱采用ESI离子源,多反应监测模式（MRM）进行正离子检测,Liguzinediol、Liguzinediol苯甲酰衍生物和内标咖啡因的选择性检测离子对分别为m/z 169.2→122.2、m/z 377.0→255.0和m/z 195.2→110.2,三者能完全分离,内源性物质对其测定没有干扰。Liguzinediol及其苯甲酰衍生物的血药浓度在5～500 ng·mL-1及2.5～100 ng·mL-1范围内线性关系良好,提取回收率分别为87.4%-95.0%和83.4%-91.2%,日内精密度的RSD分别为2.93%-5.64%和2.72%-8.09%,日间精密度的RSD分别为6.10%-10.3%和5.38%-7.90%。该方法操作简便、灵敏、快速、专属性强,符合生物样品分析要求。Sprague-Dawley（SD）大鼠12只,随机分为2组,每组雌雄各半,按25、50 mg·kg-1剂量灌胃Liguzinediol苯甲酰衍生物后药时曲线采用非房室模型进行拟合计算,Liguzinediol的Tmax分别为2.333±1.443h和2.500±0.500h,Cmax分别为432.0±180.9ng·mL-1和914.3±391.1ng·mL-1,两种剂量的半衰期分别为2.385±0.282h和3.431±0.775h,清除速率（CL/F）为0.140±0.0562L·h-1·kg-1和0.119±0.0478L·h1·kg-1,曲线下面积AUC分别为3443±1763、7761±3000μg·L-1·h。3 Liguzinediol苯甲酰衍生物在大鼠体内组织分布研究建立了LC-MS/MS的方法测定Liguzinediol在大鼠体内的分布,并测定了大鼠体内九个脏器（心、肝、脾、肺、肾、胃、肌肉、小肠、脑）4个时间点（1、2、8、24h）的Liguzinediol含量,进行了组织器官的分布研究。在灌胃给药Liguzinediol苯甲酰衍生物25 mg·kg-1后,发现药物能分布到大部分组织中,但含量均较低,其中小肠和胃中的分布相对较多。在前期Liguzinediol及其苯甲酰衍生物的药动学研究基础上,比较了灌胃给药后,两者半衰期、达峰时间、清除速率、曲线下面积等方面的药动学参数以及组织分布情况,比较结果表明Liguzinediol苯甲酰衍生物作为前药,使Liguzinediol具有较长的半衰期,可以延长药效,但是在血药浓度水平和生物利用度方面较低。故而,单从药代动力学方面评价,Liguzinediol苯甲酰衍生物的成药性较差,在今后的研究中需要解决其生物利用度较低的问题。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 综述
• 第一节 Liguzinediol的研究进展
• 第二节 药代动力学的研究进展
• 参考文献
• 第一章 Liguzinediol在大鼠体内的药代动力学研究
• 第一节 LC-MS/MS测定大鼠血浆中Liguzinediol浓度的方法学研究
• 第二节 LC-MS/MS研究Liguzinediol在大鼠体内的药代动力学
• 参考文献
• 第三节 LC-MS/MS测定组织样本中Liguzinediol浓度的方法学研究
• 第四节 Liguzinediol在大鼠体内的组织分布研究
• 参考文献
• 第二章 Liguzinediol苯甲酰衍生物的合成及药代动力学研究
• 第一节 Liguzinediol苯甲酰衍生物的合成及活性验证
• 参考文献
• 第二节 LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中Liguzinediol苯甲酰衍生物及Liguzinediol浓度的方法学研究
• 第三节 Liguzinediol苯甲酰衍生物在大鼠体内的药代动力学研究
• 第四节 Liguzinediol苯甲酰衍生物在大鼠体内的组织分布
• 参考文献
• 第五节 Liguzinediol及其苯甲酰衍生物的药动学特性比较
• 结语
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 致谢