黄芪总苷对小鼠日本血吸虫病肝纤维化病变、TGF-β1及其受体表达的影响

论文摘要

背景和目的日本血吸虫病肝纤维化是导致门静脉高压、腹水和上消化道出血的主要原因,也是日本血吸虫病患者死亡的主要原因。针对血吸虫病的发生发展过程,治疗主要针对以下三个关键环节:杀虫、抑制虫卵肉芽肿以及延缓甚至阻止肝纤维化。杀虫药有效杀虫后,肝组织内的虫卵结节及纤维化仍能继续发展。目前尚无理想的抗血吸虫病肝纤维化药物。中药黄芪的有效部位群黄芪总苷（astrogalosides,AST）是一种新的有效的抗肝纤维化药物,研究表明AST具有显著的抗炎、抗损伤、抗肝纤维化和免疫调节作用,而且毒副作用小。迄今未见AST体内尤其是给予有效的杀虫药后对血吸虫病肝纤维化影响的报道。研究表明血吸虫病肝纤维化的发生与肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）的激活及门管区成纤维细胞（portal fibroblast,PF）的参与有关,转化生长因子β1（transforming growthfactor-betal,TGF-β1）是已知最强的肝星状细胞激活和促纤维化因子。本课题旨在研究AST对小鼠血吸虫病肝纤维化及TGF-β1及其受体表达的影响。方法以日本血吸虫尾蚴感染120只ICR小鼠制作肝纤维化动物模型,5 wk随机分为:AST高剂量组(20mg·kg-1·d-1)、AST低剂量组(10mg·kg-1·d-1)、阳性药组(护肝片540 mg·kg-1·d-1)和模型对照组,各组均于感染40天后,吡喹酮杀虫2天(500mg·kg-1·d-1)。同时设置正常对照组30只。感染后6、10和14 wk,每组随机处死10只,观察肝脏指数;应用HE和天狼猩红染色观察小鼠虫卵结节大小及纤维化程度;构建组织芯片,采用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）PV二步法和SP法检测肝组织虫卵结节中α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达,利用Image-pro plus5..0.2进行定量分析,采用平均光密度（mean opticaldensity,MOD）值表示组织中的上述蛋白相对含量。结果（1）感染后6wk模型组小鼠肝组织可见急性血吸虫虫卵结节形成,10wk形成以成纤维细胞及单核细胞为主的慢性虫卵结节,结节面积明显增大,结节周围见大量胶原纤维沉积,14wk见结节及门管区大量胶原纤维沉积并互相联通,形成血吸虫病的干线型纤维化。（2）感染后10 wk及14 wk,AST高、低剂量组与模型组相比较,肝组织血吸虫虫卵结节显著缩小,纤维化程度明显减轻,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量明显减低。感染后10wk,AST高剂量组间Ⅲ型胶原蛋白含量较AST低剂量组显著减少（P＜0.01）。（3）感染后10wk,AST高、低剂量组与模型组相比较,肝组织虫卵结节周围的α-SMA阳性表达明显降低（P＜0.05）。（4）感染后10、14wk时,2个剂量组TGF-β1蛋白表达均较模型组明显降低,各实验组（模型组及AST高、低剂量租）之间TBRⅠ、Ⅱ蛋白表达无差异。（5）感染后6wk,各实验组之间各参数均无统计学差异。结论（1）成功利用日本血吸虫尾蚴感染小鼠制作了血吸虫肝病及其肝纤维化模型。（2）日本血吸虫病肝纤维化与肌成纤维细胞数增多,Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成、TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达增加有关。（3）AST对日本血吸虫病肝纤维化的形成有一定的抑制作用,其机制可能是:a)AST缩小日本血吸虫病虫卵结节,抑制肝组织内ECM的合成;b)AST下调TGF-β1的表达,抑制HSCs的活化、增殖。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
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• 1 引言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 6 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献