论文摘要
研究背景和目的:当前,利用遗传工程方法制作人类疾病的基因工程小鼠已成为研究人类重大疾病（包括传染病、肿瘤、心血管疾病、代谢性疾病、老年性疾病、精神性疾病及遗传病等）的重要方法和手段。与普通实验小鼠相比,基因工程小鼠具有无法比拟的巨大优势,它能够模拟人类疾病在体内的自然发生过程,更有利于临床治疗研究和药物开发,同时它又能够将疾病的机理研究推进到分子水平,更有利于新的药物靶点的发现。用基因工程小鼠与自发疾病小鼠模型杂交,来研究目的基因在疾病中的作用,是目前人类重大疾病功能基因研究中最先进的技术。为了更准确的研究上述基因在炎症、肿瘤等疾病中的功能,充分利用基因工程小鼠模型在生命科学研究的巨大优势,本实验室依据研究方向构建了4种基因工程小鼠,分别是Shkbp1基因剔除小鼠,SGTa基因剔除小鼠,pVA-hCD2-Nef基因剔除小鼠和胰岛过表达Slit2蛋白的Rip-hSlit2小鼠,并用遗传学方法获得具有稳定遗传背景的纯合子小鼠,希望通过与ApoE KO, Rip1-Tag2, ApcMin, TRAMP和MMTV-PvMT等疾病小鼠杂交,发现相关基因在炎症、肿瘤和血管疾病中的作用。方法:1基因工程小鼠的饲养各品系基因工程小鼠饲养于SPF级环境下,根据需要进行配种,将哺乳期结束的幼鼠及时分笼,为纯合子小鼠的筛选做好准备。2稳定遗传的基因工程小鼠品系的建立与纯合子的筛选采用经典遗传学中的孟德尔定律将转基因小鼠进行一定方式的交配,结合PCR方法检测目的基因。3 Shkbp1基因对小鼠肿瘤生长的影响利用Shkbp1基因剔除纯合子小鼠为实验组,野生型129小鼠作为对照组,建立B16黑色素瘤皮下移植瘤模型,通过测量肿瘤体积、肿瘤重量,初步探讨Shkbp1敲除后对小鼠肿瘤生长和转移的影响。结果:1通过129小鼠与F2代阳性小鼠测交,检测子代小鼠的基因型,筛选出1只雄性、3只雌性Shkbp1小鼠,其子代基因鉴定结果阳性率为100%;筛选出2只雄性、1只雌性SGTa小鼠,其子代基因鉴定结果阳性率为100%; pVA-hCD2-Nef小鼠,Rip-hSlit2小鼠筛选仍在进行中。2 Shkbp1敲除对小鼠B16皮下移植瘤具有抑制趋势,但是统计结果没有显著性差异。结论1成功构建了Shkbp1基因剔除的纯合子小鼠,并初步验证了Shkbp1基因在肿瘤生长和转移中的作用2成功构建了SGTa基因的纯合子小鼠模型。获得了F2代pVA-hCD2-Nef小鼠和F1代Rip-hSlit2小鼠。
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相关论文文献
- [1].Shkbp1缺失对小鼠T淋巴细胞系亚群的影响[J]. 中国比较医学杂志 2017(04)