平肝潜阳法治疗高血压肝阳上亢证大鼠下丘脑、肾上腺的蛋白质组学研究

论文摘要

目的1.建立正常大鼠、高血压肝阳上亢证大鼠及高血压肝阳上亢证平肝潜阳法治疗后大鼠的下丘脑和肾上腺组织双向凝胶电泳图谱。2.观察高血压肝阳上亢证大鼠平肝潜阳法治疗前后下丘脑及肾上腺的蛋白质表达差异,从蛋白质组学水平探讨其降血压和改善肝阳上亢证症状的分子机制,为寻找新的药物标志蛋白提供理论依据。方法1.以SHR大鼠加灌服附子汤法制备高血压肝阳上亢证大鼠模型。2.二维凝胶电泳分离大鼠下丘脑及肾上腺蛋白质,凝胶经考染显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析,获得差异表达蛋白质。3.利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱和数据库分析鉴定差异表达蛋白质。结果1.动物模型的复制:模型组和PGQYF组大鼠在附子汤灌胃3周后,其易激惹程度发生变化,多表现为Ⅲ级,且大部分出现了结合膜充血;饮水量明显增加;收缩压明显升高。与正常对照组及造模前比较,差异均具有统计学意义（P＜0.01）。经PGQYF治疗后（第6周末）,其易激惹程度及结合膜充血均好转,易激惹程度多表现为Ⅰ和Ⅱ级,饮水量及收缩压较治疗前及模型组明显减少,差异均具有统计学意义（P＜0.01）。2.各组总蛋白2-DE图谱的建立及差异蛋白质识别:建立了正常大鼠、高血压肝阳上亢证大鼠及平肝潜阳法治疗后大鼠重复性好的下丘脑和肾上腺组织蛋白质组表达图谱。通过PDQuest图像分析,发现了27个差异表达蛋白质点:和正常组比较,肝阳上亢模型组下丘脑图谱中1、2、4、5、7、8号蛋白质点、肾上腺图谱中2、3、5、6、7号蛋白质点表达上升2倍及以上,且其在PGQYF组中表达下降2倍及以上,大致处于与正常组同一水平或低于正常对照组低;肝阳上亢模型组下丘脑图谱中3、6、9、10、11、12、13、14、15号蛋白质点、肾上腺图谱中1、4、8、9、10、11、12号蛋白质点表达下降2倍及以上,且同一点在PGQYF组中表达上升2倍及以上,大致处于与正常组同一水平或高于正常对照组。3.差异蛋白质点质谱鉴定及蛋白功能分类:选取25个蛋白质点进行质谱鉴定,成功鉴定22个蛋白质点。根据NCBI、MSDB数据库中提供的信息,这些差异蛋白质涉及多种蛋白种类,如参与能量代谢的酶类、抗氧化蛋白、神经内分泌相关蛋白、细胞信号转导蛋白、细胞骨架相关蛋白等。其中硫氧还蛋白过氧化物酶-Ⅱ（PRX-Ⅱ）、热休克蛋白-27（HSP-27）、膜联蛋白-Al（Annexin-Al）等蛋白可能与高血压肝阳上亢证及平肝潜阳治疗法密切相关。结论平肝潜阳法治疗后,高血压肝阳上亢证大鼠症状改善,血压降低,可能与下丘脑和肾上腺组织中某些蛋白质的改变有关。成功鉴定了高血压肝阳上亢证平肝潜阳法治疗前后下丘脑及肾上腺组织差异表达蛋白,为深入研究高血压病肝阳上亢证病理生理机制及平肝潜阳法治疗的作用分子机制奠定基础。

论文目录

• 一 中文摘要
• 二 英文摘要
• 三 目录
• 四 英文缩写词汇集表
• 五 论文正文
• 前言
• 实验技术路线图
• 第一章 动物模型的制备
• 第二章 蛋白质分离-双向凝胶二维电泳的建立
• 第三章 蛋白质鉴定-质谱分析
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 六 综述
• 七 致谢
• 八 在校期间科研成果及发表论文