HIV-1治疗性重组DNA疫苗的构建、纯化及实验免疫研究

论文题目: HIV-1治疗性重组DNA疫苗的构建、纯化及实验免疫研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 宋英今

导师: 金宁一

关键词: 新型,治疗,重组,疫苗,构建,纯化,免疫

文献来源: 吉林大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本论文利用分子生物学、免疫学、分子病毒学、生物化学、生物信息学等技术和手段进行了新型治疗性HIV-1 重组核酸疫苗的构建、纯化及实验免疫学研究,内容概述如下: 本实验以选择HIV-1 优势抗原表位为原则,提出以HIV-1 表位基因为基础,以HIV-1 巨分子颗粒p24 为支架载体分子,对抗原基因进行人工分子设计,并辅以计算机模拟来研制治疗性HIV 基因工程疫苗的新思路。该种HIV DNA 疫苗的设计在国内外尚未见报道。将经分子设计的疫苗抗原的核苷酸序列进行人工合成,获得新型HIV-1 治疗性抗原基因(MEG);以PCR 法获得HIV-1 衣壳蛋白基因p24,将其插入到MEG 基因中,获得嵌合基因MEGp24。利用新型安全性真核表达载体质粒pVAXI,构建了新型HIV-1 治疗性重组DNA 疫苗(pVAXI-MEG-p24),经过哺乳动物细胞转染结果表明,pVAXI-MEG-p24 成功地表达了MEGp24 抗原蛋白。将已构建好的治疗性HIV-1 重组DNA 疫苗的质粒(pVAXI-MEG-p24),经发酵罐建立发酵工艺,通过阴离子交换层析方法(Q Sepharose XL)进行纯化,随后将得到的质粒DNA 通过排阻层析方法进行进一步的纯化及脱盐,浓缩。经过质量鉴定结果表明,该纯化质粒疫苗符合FDA 推荐的临床用质粒DNA 的质量标准,表明所建立的工艺是可行。纯化后的重组DNA 疫苗质粒pVAX1-MEG-p24 进行实验免疫研究表明,纯化后HIV-1 重组DNA 疫苗使小鼠和恒河猴,产生了特异性体液和细胞免疫应答;治疗性HIV-1 重组DNA 疫苗(pVAXI-MEG-p24)与HIV 全结构蛋白基因疫苗(pVAXI-gag-gp120)比较研究表明,pVAXI-MEG-p24 能够诱发比全结构蛋白基因疫苗更强的表位特异性CTL 反应和抗体反应。总之,本研究以新的研究思路,对HIV 治疗性重组核酸疫苗的构建进行了

论文目录:

前言

第一篇文献综述

第一章 HIV 表位疫苗的研究进展

1 HIV/AIDS 的流行情况

2 HIV 的分子生物学特性

3 HIV 的表位疫苗

第二章核酸疫苗的研究进展

1 基因治疗和核酸疫苗

2 质粒DNA 与产物性质

3 产物的技术要求、质量控制和检测方法

4 质粒制备

5 下游工艺

6 现存通用的综合分离纯化系统

7 其它分离纯化系统

8 结论

第二篇研究内容

第一章 HIV-1 治疗性重组DNA 疫苗的设计、构建

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二章 HIV-1 治疗性重组DNA 疫苗的纯化工艺研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三章 HIV-1 治疗性重组DNA 疫苗的小鼠实验免疫研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第四章 HIV-1 治疗性重组DNA 疫苗的恒河猴实验免疫研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

结论

参考文献

中文摘要

英文摘要

致谢

导师简介

作者简介

发布时间: 2005-08-26

参考文献

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